發(fā)布時間：2018-01-28 06:46

  本文關(guān)鍵詞： 立克次體屬 基因芯片 多重PCR 化學(xué)發(fā)光測定法　出處：《軍事醫(yī)學(xué)》2015年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的建立一種能同時檢測7種立克次體的化學(xué)發(fā)光基因芯片法。方法根據(jù)NCBI公開發(fā)表的7種立克次體的序列設(shè)計引物和探針,制備立克次體甄別檢測基因芯片。利用多重不對稱PCR法擴增立克次體靶基因片段,標記的產(chǎn)物與基因芯片上的探針雜交,經(jīng)清洗、化學(xué)發(fā)光顯色后進行結(jié)果分析。在優(yōu)化的多重PCR體系、雜交反應(yīng)和化學(xué)發(fā)光檢測條件下,評價芯片的特異性、靈敏度、重復(fù)性。用實時熒光PCR法與芯片法分別檢測莫氏立克次體梯度稀釋的核酸,比較兩種方法的靈敏度。制備雙盲模擬樣本,進一步評價芯片方法的準確性。結(jié)果該研究共篩選出1對通用引物、4對特異性引物和1條立克次體屬通用探針、9條特異性檢測探針。該芯片檢測質(zhì)粒DNA的靈敏度為1.5×102~3×103拷貝/反應(yīng),檢測模擬樣本的靈敏度為103~104拷貝/μl。實時熒光PCR法與芯片法檢測結(jié)果一致,實時熒光PCR法比芯片法靈敏度高10倍。雙盲模擬樣本檢測符合率為100%。結(jié)論成功建立了可同時檢測7種立克次體的化學(xué)發(fā)光基因芯片檢測方法,為立克次體病的臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查提供了一種新的高通量檢測手段。
[Abstract]:Objective to establish a chemiluminescence gene chip method for simultaneous detection of seven Rickettsia species. Methods Primer and probe were designed according to the sequences of 7 Rickettsia strains published by NCBI. The target gene fragment of Rickettsia was amplified by multiple asymmetric PCR. The labeled product was hybridized with the probe on the gene chip and cleaned. The specificity and sensitivity of the chip were evaluated under the conditions of optimized multiplex PCR system, hybridization reaction and chemiluminescence detection. Repeatability. Real-time fluorescent PCR and chip method were used to detect the gradient dilution nucleic acid of Rickettsia Morse respectively. The sensitivity of the two methods was compared. A double-blind simulated sample was prepared. Results A total of 1 pair of universal primers, 4 pairs of specific primers and 1 common probe of Rickettsia were screened. The sensitivity of the microarray for plasmid DNA detection was 1.5 脳 10 ~ 2 ~ 3 脳 10 ~ 3 copies / reaction. The sensitivity of detecting simulated samples is 103 ~ 104copies / 渭 l. The results of real-time fluorescence PCR method are consistent with those of chip method. The sensitivity of real-time fluorescence PCR method is 10 times higher than that of chip method. The coincidence rate of double-blind analog sample detection is 1000.Conclusion A chemiluminescence gene chip method for simultaneous detection of seven Rickettsiae has been successfully established. It provides a new high-throughput detection method for the clinical diagnosis and epidemiological investigation of Rickettsia disease.
【作者單位】： 河南中醫(yī)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所;
【基金】：廣東省科技重大專項資助項目(2012A080203005)
【分類號】：R440;R513
【正文快照】： 立克次體(rickettsiae)除個別外是一類專性細胞內(nèi)寄生的革蘭陰性菌[1],而引起的立克次體病是一類重要的人畜共患自然疫源性疾病,在世界范圍內(nèi)呈散發(fā)性和季節(jié)性流行。許多節(jié)肢動物,如虱、蚤、蜱、螨等均可作為立克次體感染的傳播媒介[2]。隨著國際旅游業(yè)的發(fā)展,立克次體病被認

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1470077