本文關(guān)鍵詞：巨噬細胞極化改變在結(jié)核分枝桿菌感染及結(jié)核性肉芽腫形成和發(fā)展過程中的作用及其調(diào)控機制研究　出處：《南昌大學》2013年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：結(jié)核病(TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mtb)感染引起的慢性感染性疾病,同時也是一種免疫紊亂性疾病。目前的研究提示結(jié)核性肉芽腫在TB的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸過程中扮演了雙重角色。作為TB免疫的起始細胞和主要效應細胞,巨噬細胞始終參與了Mtb感染及肉芽腫形成、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的全過程。巨噬細胞是一種高度可塑的復雜群體,在不同的微環(huán)境下,巨噬細胞可發(fā)生表型和功能極化從而呈現(xiàn)出不同的功能。為了進一步探討不同類型巨噬細胞在Mtb感染過程中的作用,闡明結(jié)核性肉芽腫形成和發(fā)展過程中巨噬細胞的極化狀態(tài)及其可能的調(diào)控機制,本研究進行了以下四部分的探討：1不同極化狀態(tài)巨噬細胞的誘導、表型鑒定及其對Mtb的殺傷作用我們首先以人單核細胞來源的巨噬細胞(MDM)作為研究對象,采用IFN-γ+LPS作為M1型巨噬細胞的誘導劑,IL-4作為M2型巨噬細胞的誘導劑,在體外對MDM進行了極化誘導,并對誘導后M1和M2型巨噬細胞的分子表型及細胞因子分泌情況進行了鑒定。以未處理的MDM作為對照,我們對體外誘導的不同類型的巨噬細胞用Real-Time PCR檢測了CXCL10、CXCL11、CCR7,CCL17和CCLl8基因的表達；用流式細胞術(shù)檢測了巨噬細胞上HLA-DR、CD86,CD163(清道夫受體)和CD206(甘露糖受體)的表達；用ELISA檢測了細胞培養(yǎng)上清中IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α、IFN-γ和CCL18的含量。綜合分析巨噬細胞的表面活性標志的表達特征和細胞因子檢測結(jié)果,表明我們在體外成功地用IFN-γ+LPS誘導了M1型巨噬細胞,用IL-4誘導了M2型巨噬細胞。在此基礎上,我們進一步比較了Mtb感染對巨噬細胞極化表型的影響,以及不同極化狀態(tài)的巨噬細胞對Mtb的殺傷作用。研究發(fā)現(xiàn)Mtb感染后可以誘導巨噬細胞形成M1/M2混合表型；與未處理對照比較,M1型巨噬細胞對Mtb的殺傷功能顯著增強,而M2型巨噬細胞的殺菌功能則受到明顯抑制。本部分研究首次揭示了Mtb感染后巨噬細胞的活化類型及不同類型巨噬細胞在Mtb感染過程中的作用。2人結(jié)核性肉芽腫巨噬細胞的表型鑒定在本研究中,我們采用免疫組化染色對人肺結(jié)核性肉芽腫組織進行檢測,發(fā)現(xiàn)有大量的活化巨噬細胞浸潤,M1型巨噬細胞的活化標志誘導型一氧化氮合酶(iNOS)和M2型巨噬細胞的表面標志物CD206在肉芽腫巨噬細胞均有表達。Real-Time PCR檢測顯示,與對照組織相比,M1型巨噬細胞相關(guān)基因CXCL10和CXCL11,M2型巨噬細胞相關(guān)基因CCL17和CCL18在結(jié)核性肉芽腫組織中均表達上調(diào)。本部分的研究結(jié)果提示人肺結(jié)核性肉芽腫中有M1/M2混合型巨噬細胞浸潤,這些極化的巨噬細胞在Mtb感染過程中扮演重要角色。3結(jié)核性肉芽腫形成和發(fā)展不同階段的巨噬細胞極化表型和功能改變研究在本研究中,我們通過Mtb感染人外周血單個核細胞(PBMC),成功構(gòu)建人結(jié)核性肉芽腫體外模型,發(fā)現(xiàn)在肉芽腫內(nèi)有大量活化的巨噬細胞聚集。硝基四氮唑藍(NBT)還原試驗檢測結(jié)果顯示,Mtb感染可以增強肉芽腫巨噬細胞呼吸爆發(fā)功能,誘導肉芽腫巨噬細胞活化。通過對巨噬細胞極化標志物及培養(yǎng)上清液細胞因子水平檢測發(fā)現(xiàn),在Mtb感染早期肉芽腫巨噬細胞活化為具有殺菌功能的M1型巨噬細胞,隨著感染時間的延長,巨噬細胞逐漸向M2型改變。這些研究結(jié)果揭示了結(jié)核性肉芽腫形成和發(fā)展過程中巨噬細胞的活化類型及功能變化。4巨噬細胞的極化類型及氧化還原狀態(tài)對肉芽腫形成和發(fā)展的影響及意義在本研究中,我們在結(jié)核性肉芽腫體外模型構(gòu)建前,分別將巨噬細胞誘導分化為M1和M2型。研究發(fā)現(xiàn),誘導的M1型巨噬細胞有利于肉芽腫組織對結(jié)核菌的殺傷,促進肉芽腫的形成。油紅O染色發(fā)現(xiàn),在Mtb感染過程中肉芽腫巨噬細胞發(fā)生泡沫化改變,M2型巨噬細胞可顯著促進泡沫巨噬細胞的形成,從而導致Mtb在細胞內(nèi)潛伏感染。此外,我們還發(fā)現(xiàn)Mtb感染后肉芽腫巨噬細胞還原型谷胱甘肽(GSH)水平逐漸降低,促進肉芽腫呈氧化應激狀態(tài)。抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)可以顯著糾正細胞內(nèi)的氧化應激,增強巨噬細胞對Mtb的殺菌活性,有利于控制結(jié)核菌感染。研究結(jié)果提供了一種未來TB臨床治療的可能性方案,即通過誘導M1型巨噬細胞從而控制Mtb潛伏感染的新治療策略,為結(jié)核肉芽腫組織因氧化應激誘導的巨噬細胞殺菌活性減低提供新的靶點和研究思路。
[Abstract]:In order to further study the role of macrophages in the pathogenesis of Mtb infection , the expression of IL - 6 , IL - 10 , IL - 12 , TNF - 偽 , IFN - 緯 , and IL - 12 in macrophages were investigated . In this study , it was found that Mtb infection could enhance the activity of macrophages and promote the formation of granulomas .

【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R52

【共引文獻】

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本文編號：1441621