本文關鍵詞：恙蟲病東方體快速檢測方法的建立和評估　出處：《南京師范大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：恙蟲病(scrub typhus)是由恙蟲病東方體(orientia tsutusgamushi)通過恙螨幼蟲叮咬而傳播的一種自然疫源性疾病。據(jù)調(diào)查,在亞太地區(qū),大約10億人群有潛在感染風險,每年約100萬新病例出現(xiàn)。由于自然疫源地不斷擴大,恙蟲病感染已經(jīng)成為亞太地區(qū)一個亟需解決的公共衛(wèi)生問題。本病臨床上以突發(fā)高熱、淋巴結腫大、蟲咬潰瘍和皮疹為主要特征,輕者呈自限性流感樣綜合征,嚴重者臟器衰竭甚至死亡。若及早診斷并服用抗生素治療,可避免并發(fā)癥。但由于恙蟲病的臨床癥狀和其他熱性傳染病有諸多相似,極易引起誤診。傳統(tǒng)的血清學檢測法間接免疫熒光試驗被稱為“金標”,但需制備菌體抗原,步驟操作繁瑣復雜,并且需要生物安全實驗室和熟練的技術人員,在基層醫(yī)療單位應用受到很大的限制。因此,建立簡便、準確、快速、敏感,適合在偏遠地區(qū)、條件相對簡陋的現(xiàn)場使用的恙蟲病診斷方法,是極其必要的。 近年來,隨著分子生物學的發(fā)展,大量制備高純度重組抗原成為可能,使得血清學方法檢測病原體感染更為便捷,應用前景更為廣闊；與血清學方法比較,核酸檢測方法可以大大縮短病原體感染的“窗口期”,能更早期確診病原體感染。恙蟲病東方體外膜蛋白56kD是最重要的病原體結構蛋白,已被研究者視為恙蟲病免疫學和核酸檢測的重要靶標。本研究通過PCR選擇性擴增出東方體合肥株和三界株編碼56kD外膜蛋白部分截短基因,克隆至原核載體pET28a構建表達載體,對重組表達產(chǎn)物進行活性鑒定分析；以合肥株和三界56kD截短重組混合抗原作為診斷抗原,制備膠體金免疫層析診斷試劑,通過檢測血樣中恙蟲病東方體的IgM和IgG評估其檢測效能；同時,以56kD外膜蛋白基因為靶基因,研究構建了可視化環(huán)介導恒溫擴增法和染料熒光定量PCR法,實現(xiàn)恙蟲病東方體的早期靈敏檢測。本研究建立的血清學和核酸檢測方法均具有較好的敏感性和特異性,其中熒光定量PCR可用于恙蟲病感染的實驗室早期快速診斷,并可以定量評價體內(nèi)東方體的感染滴度,而膠體金免疫層析法和可視化環(huán)介導恒溫擴增法適用于農(nóng)村、基層醫(yī)院及現(xiàn)場的快速篩查。上述檢測方法的建立可為恙蟲病早期及時診治提供技術支持。
[Abstract]:In the Asia - Pacific region , some 1 billion people have a potential risk of infection , and about 1 million new cases appear in the Asia - Pacific region . In recent years , with the development of molecular biology , a large number of high - purity recombinant antigens have become possible , so that the serological method can detect pathogen infection more conveniently and has a wider application prospect ; and compared with the serological method , the nucleic acid detection method can greatly shorten the window period of pathogen infection . In this study , 56 kD outer membrane protein ( 56 kD ) was cloned into prokaryotic expression vector pET28a as the target gene , and the recombinant expression product was cloned into prokaryotic expression vector pET28a .

【學位授予單位】：南京師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R513.2

【參考文獻】

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