發(fā)布時(shí)間：2018-01-17 14:05

  本文關(guān)鍵詞：山東地區(qū)恙蟲(chóng)病流行特征及ELISA臨床診斷價(jià)值研究　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：研究背景恙蟲(chóng)病(Scrubtyphus),又稱叢林斑疹傷寒,是一種常見(jiàn)的自然疫源性疾病。其病原體為恙蟲(chóng)病東方體(Orientiatsutsugamushi,Ot),鼠類為其主要的儲(chǔ)存宿主,經(jīng)由恙螨幼蟲(chóng)叮咬而傳播給人。在我國(guó),恙蟲(chóng)病原來(lái)僅流行于長(zhǎng)江以南地區(qū),流行特征為夏季型。自1986年在山東省蒙陰縣發(fā)現(xiàn)恙蟲(chóng)病流行以來(lái),該病的流行范圍蔓延至北緯31°以北地區(qū),流行特征為秋冬型。山東地區(qū)是秋冬型恙蟲(chóng)病的重點(diǎn)疫區(qū)之一,報(bào)告病例數(shù)逐年增加,新的流行區(qū)域陸續(xù)出現(xiàn),疾病負(fù)擔(dān)日益加重。因此,掌握該地區(qū)恙蟲(chóng)病的流行病學(xué)特征對(duì)該病的預(yù)防控制具有重要意義。由于Ot變異活躍,其型別分布在不同國(guó)家或地區(qū)差異明顯,所以充分了解一個(gè)國(guó)家或地區(qū)Ot的基因型和血清型分布,對(duì)該病的診斷及預(yù)防具有重要作用。相關(guān)文獻(xiàn)表明,Gilliam型為我國(guó)Ot主要流行的血清型,其次為Karp型。山東地區(qū)對(duì)Ot感染基因型的研究較多,但對(duì)Ot血清型分布及其與基因型的關(guān)系研究較少。因此,分析山東地區(qū)恙蟲(chóng)病Ot型別分布,尤其是血清型分布及其感染特征,是該病流行病學(xué)研究的重要內(nèi)容。目前,恙蟲(chóng)病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要涉及病原學(xué)診斷、血清學(xué)診斷與分子生物學(xué)診斷,其中血清學(xué)診斷為恙蟲(chóng)病最常用的診斷方法。綜合考慮成本、效率、操作以及判定結(jié)果的可讀性,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)具有良好的臨床應(yīng)用前景,或可成為間接免疫熒光試驗(yàn)(Indirect ImmunofluorescenceAssay,IFA)的替代性診斷方法。我國(guó)醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)用最廣泛的診斷技術(shù)為非特異性的外斐試驗(yàn)(Weil-Felixtest,WFT),但該法靈敏度、特異度較低。國(guó)內(nèi)特異性的診斷試劑多為相關(guān)單位自行研制使用,目前尚無(wú)正式上市的診斷產(chǎn)品可供臨床使用。國(guó)外廣泛應(yīng)用的商業(yè)化ELISA診斷試劑盒為美國(guó)InBios公司生產(chǎn)的Scrub Typhus Detect ELISA System試劑盒,而國(guó)內(nèi)目前還沒(méi)有相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)該診斷試劑在我國(guó)的應(yīng)用進(jìn)行評(píng)價(jià)研究。因此,評(píng)價(jià)了解目前市面可供選擇的ELISA試劑的臨床診斷價(jià)值有著十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。研究目的1.基于2006～2016年山東省恙蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù),運(yùn)用空間流行病學(xué)方法,了解山東地區(qū)恙蟲(chóng)病的時(shí)空分布特征。2.根據(jù)2013～2015年恙蟲(chóng)病新發(fā)地區(qū)的臨床及流行病學(xué)數(shù)據(jù),分析了解恙蟲(chóng)病新疫區(qū)該病的流行病學(xué)特征與Ot基因型,以及Ot感染病例的臨床特點(diǎn)。3.利用2015年在山東省各調(diào)查點(diǎn)收集的病例及疑似病例標(biāo)本,分析山東地區(qū)Ot型別以及不同血清型感染的臨床、流行病學(xué)特征。4.以 IFA 為金標(biāo)準(zhǔn),對(duì) InBios Scrub Typhus Detect ELISA System 試劑盒在我國(guó)應(yīng)用的臨床診斷價(jià)值進(jìn)行分析,為該病的臨床診斷提供參考。研究方法1.資料來(lái)源自山東省疾病報(bào)告信息系統(tǒng)(Shandong Diseases Reporting InformationSystem,SDRIS)收集2006～2016年山東地區(qū)的恙蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)。2006～2016年人口學(xué)數(shù)據(jù)源自山東省各市統(tǒng)計(jì)信息網(wǎng)。根據(jù)既往掌握的疫情資料,2015年1月至2015年12月在山東地區(qū)設(shè)立8個(gè)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查點(diǎn),分別為萊蕪市的萊城區(qū),臨沂市的蒙陰縣,青島市的黃島區(qū)、即墨市,淄博市的沂源縣,和棗莊市的市中區(qū)、嶧城區(qū)和臺(tái)兒莊區(qū),并在各調(diào)查點(diǎn)設(shè)置重點(diǎn)監(jiān)測(cè)醫(yī)院。經(jīng)過(guò)知情同意告知后,采集恙蟲(chóng)病病例或疑似病例的急性期抗凝全血、血清、焦痂標(biāo)本,收集其臨床及流行病學(xué)問(wèn)卷調(diào)查信息。2.研究方法(1)空間流行病學(xué)分析以2006～2016年SDRIS的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)為基礎(chǔ),以地理信息系統(tǒng)軟件(ArcGIS 9.3)、空間計(jì)量軟件(GeoDa0.9.5-i)與空間掃描分析軟件(SatScan9.1.1)繪制發(fā)病率地區(qū)分布圖、局域型空間自相關(guān)(Local indicators of spatial autocorrelation,LISA)聚集圖和空間掃描聚集圖;經(jīng)計(jì)算Moran'sI、相對(duì)危險(xiǎn)度(Relative risk,RR)、對(duì)數(shù)似然比(Log-likelihood ratio,LLR)等指標(biāo)描述分析恙蟲(chóng)病的時(shí)空分布特征。(2)基因型分析提取病例全血及焦痂標(biāo)本DNA,利用巢式PCR技術(shù)對(duì)Of 56kDa型特異性抗原(Type-specific antigen,TSA)的基因編碼序列進(jìn)行擴(kuò)增。以Mega5.0軟件,將所得測(cè)序結(jié)果與GenBank獲取的參考序列進(jìn)行比對(duì)。采用鄰接法(Neighbor-joining,NJ)繪制系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),以 Lasergene7.1 軟件計(jì)算 Ot 56kDa TSA的核苷酸及氨基酸序列間的同源性。(3)血清學(xué)診斷應(yīng)用IFA檢測(cè)血清標(biāo)本的Ot抗體并進(jìn)行血清型鑒定,人血清抗Of IgM≥1:64或IgG≥1:512出現(xiàn)特異性綠色熒光顆粒則判為陽(yáng)性反應(yīng)。使用InBios Scrub Typhus Detect ELISA System試劑盒對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行ELISA檢測(cè)。以IFA為金標(biāo)準(zhǔn),通過(guò)診斷試驗(yàn)的真實(shí)性評(píng)價(jià)及受試者工作特征曲線(Receiver operating characteristic curve,ROC)等參數(shù)對(duì)該ELISA試劑盒的臨床診斷價(jià)值進(jìn)行評(píng)價(jià)。(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用Epidata 3.1軟件錄入數(shù)據(jù),統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行。計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)或百分比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述,樣本間構(gòu)成比的差異采用χ2檢驗(yàn)或Fisher檢驗(yàn)分析進(jìn)行比較。連續(xù)型變量采用平均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差或中位數(shù)描述,以多樣本單因素方差分析或Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。結(jié)果1.空間流行病學(xué)分析2006～2016年山東地區(qū)共報(bào)告6866例恙蟲(chóng)病病例,年平均發(fā)病率呈升高趨勢(shì),17個(gè)地(市)中有16個(gè)地(市)發(fā)現(xiàn)恙蟲(chóng)病病例。年平均發(fā)病率全局Moran's I為0.5474(P0.01)。LISA聚集圖顯示"高-高"(H-H)聚集區(qū)位于日照市東港區(qū)、五蓮縣、嵐山區(qū)和莒縣,泰安新泰市,萊蕪萊城區(qū)和鋼城區(qū),臨沂蒙陰縣、蘭陵縣、羅莊區(qū)、臨沭縣,青島黃島區(qū)與淄博沂源縣�？臻g掃描發(fā)現(xiàn),2006～2016年山東地區(qū)恙蟲(chóng)病空間聚集區(qū)中心總體上存在向東移動(dòng)的趨勢(shì)。2006～2010以及2012年,一級(jí)聚集區(qū)中心主要位于山東省中南部山區(qū),2011以及2013～2016年集中于東部丘陵;2008,2011以及2013～2016年聚集區(qū)半徑呈擴(kuò)大趨勢(shì)。2.恙蟲(chóng)病新疫區(qū)流行病學(xué)特征2013～2015年恙蟲(chóng)病新疫區(qū)棗莊地區(qū)共報(bào)告恙蟲(chóng)病病例229例,其中多數(shù)為女性(55.5%)、50歲及以上老年人(68.6%)及農(nóng)民(83.4%),發(fā)病高峰為10～11月。主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱(100%)、焦痂(97.8%)、疲乏(87.0%)、.食欲不振(76.1%)、全身酸痛(76.1%)及頭痛(67.4%)。其中,5例病例并發(fā)肝損傷,1例病例并發(fā)支氣管炎。對(duì)18份經(jīng)巢式PCR篩選出的患者陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)生與序列同源性分析,顯示Ot優(yōu)勢(shì)基因型屬于類Kawasaki(17/18),與日本Kawasaki株的同源性為95.9%～96.1%,序列之間的同源性為99.5%～100%。另一條序列的基因型屬于變異株Sta-07,該型別序列間同源性為99.5%～100%。2015年,在棗莊地區(qū)各調(diào)查點(diǎn)共捕獲宿主鼠類115只,其中褐家鼠68只(59.1%)、小家鼠43只(37.4%)、黑線姬鼠4只(3.5%)。自鼠體共檢獲3種恙螨,分別為須纖恙瞞、居中纖恙螨和小盾纖恙螨。經(jīng)PCR分析,自宿主動(dòng)物及恙螨標(biāo)本中未檢測(cè)到O陽(yáng)性標(biāo)本。3.恙蟲(chóng)病病例感染Ot型別及各血清型感染的臨床及流行病學(xué)特征分析2015年自調(diào)查點(diǎn)共收集171份急性期全血標(biāo)本及22份恢復(fù)期全血標(biāo)本,其中56份患者全血標(biāo)本陽(yáng)性。Ot流行株包含類Kawasaki和Sta-07兩種基因型。其中55份為類Kawasaki型,與日本Kawasaki株的同源性95.3%～96.2%,序列間同源性為98.2%～100%。1條序列YH2015029-ZZ屬于變異株Sta-07,該型別間序列的同源性為99.5%～100%。對(duì)152份急性期血清、50份恢復(fù)期血清的IFA檢測(cè)結(jié)果顯示,IgM陽(yáng)性144份,IgG陽(yáng)性32份。陽(yáng)性率分別為94.7%和64.0%。分型結(jié)果為Karp型25份(14.2%),Gilliam 型 126 份(71.6%),Kato 型 18 份(10.2%),Boryang 型7份(4.0%)。各血清型感染人群的性別、年齡、職業(yè)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。臨床特征分析示,發(fā)熱、焦痂、疲乏、皮疹、食欲不振、頭痛、全身酸痛為4種血清型最常見(jiàn)的癥狀,各臨床表現(xiàn)在各血清型間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)主要為丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、直接膽紅素、C反應(yīng)蛋白不同程度升高,嗜酸性粒細(xì)胞百分比、血清肌酐與尿素氮不同程度降低。各實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)在各血清型間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)50份經(jīng)Of基因型鑒定且成功分離血清的血標(biāo)本分析結(jié)果顯示,49份標(biāo)本的Ot基因型為類Kawasaki型,其所對(duì)應(yīng)的血清型分別為Gilliam型(46份93.9%),Karp 型(1 份,2.0%)和 Kato 型(2 份,4.1%);1 份基因型為 Sta-07型,血清型為Boryang。4.ELISA臨床診斷價(jià)值對(duì)202份恙蟲(chóng)病病例血清進(jìn)行ELISA檢測(cè),其中陽(yáng)性154份,陰性48份。以IFA作為金標(biāo)準(zhǔn),ELISA診斷試驗(yàn)的靈敏度及95%置信區(qū)間(Confidence interval,CI)為 85.2%(80.0%～90.4%);特異度及95%為 84.6%(70.7%～98.5%);假陰性率為14.8%,假陽(yáng)性率為15.4%;粗符合率為85.1%,95%CI(80.2%～90.0%);正確指數(shù)為 0.70,95%CI(0.55～0.85);陽(yáng)性似然比 5.54,95%CI(2.24～13.67);陰性似然比 0.17,95%CI(0.12～0.25)。ROC 曲線下面積為 0.859(P0.001),最佳臨界吸光度(Optical density,OD)值為 0.4995。巢式PCR與ELISA聯(lián)合診斷,串聯(lián)試驗(yàn)的靈敏度及95%CI為31.9%(24.1%～39.7%),特異度及 95%CI 為 100.0%(74.7%～100.0%);并聯(lián)試驗(yàn)的靈敏度及 95%CI 為 89.9%(84.9%～94.9%),特異度及 95%CI 為 86.7%(69.5%～100.0%)。特異性焦痂與ELISA聯(lián)合診斷,串聯(lián)試驗(yàn)靈敏度及95%CI為 77.2%(70.1%～84.3%),特異度及 95%CI為 87.5%(71.3%～100.0%);并聯(lián)試驗(yàn)靈敏度及95%CI為100.0%(96.6%～100.0%),特異度及95%CI為31.3%(8.6%～54.0%)。巢式PCR、特異性焦痂與ELISA聯(lián)合診斷,串聯(lián)試驗(yàn)靈敏度及 95%CI 為 27.5%(19.9%～35.1%),特異度及 95%CI 為 100.0%(19.8%～100.0%);并聯(lián)試驗(yàn)靈敏度及 95%CI為 100.0%(96.4%～100.0%),特異度及 95%CI 為 50.0%(2.7%～97.3%)。結(jié)論1.山東地區(qū)恙蟲(chóng)病的時(shí)空分布存在空間正相關(guān)和空間聚集性。2006～2016年間恙蟲(chóng)病流行范圍不斷擴(kuò)大,高發(fā)地區(qū)不斷增多。空間聚集區(qū)的中心整體向東移動(dòng),輻射半徑呈擴(kuò)大趨勢(shì)。2.新疫區(qū)棗莊地區(qū)中老年女性農(nóng)民為該病的多發(fā)人群,秋季為發(fā)病高峰季;焦痂可作為新疫區(qū)恙蟲(chóng)病臨床診斷的重要參考體征�；颊逴t感染發(fā)現(xiàn)類Kawasaki和Sta-07兩種基因型,前者為本地區(qū)的優(yōu)勢(shì)株。3.山東地區(qū)至少存在包括Gilliam、Kato、Karp和Boryang在內(nèi)的4種Ot感染血清型,對(duì)應(yīng)Ot基因型為類Kawasaki和Sta-07,其中Gilliam型為主要流行血清型。各血清型恙蟲(chóng)病病例的流行病學(xué)、臨床表現(xiàn)與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)相似,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.InBios Scrub Typhus Detect ELISA System試劑盒診斷恙蟲(chóng)病的靈敏度及95%CI為 85.2%(80.0%～90.4%),特異度及 95%CI為 84.6%(70.7%～98.5%)。ROC曲線下面積為0.859,最佳臨界吸光度值為0.4995。將該病患者的特異性焦痂與ELISA并聯(lián)診斷,ELISA的臨床診斷靈敏度可提高至100.0%。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R513.2;R181.3

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2 鄭麗;山東地區(qū)恙蟲(chóng)病東方體感染分子流行病學(xué)研究[D];山東大學(xué);2016年

3 張桂娟;贛州市恙蟲(chóng)病分子流行病學(xué)及臨床特征的研究[D];南昌大學(xué);2016年

4 楊慧;山東地區(qū)恙蟲(chóng)病流行特征及ELISA臨床診斷價(jià)值研究[D];山東大學(xué);2017年

5 耿美玲;恙蟲(chóng)病東方體快速檢測(cè)方法的建立和評(píng)估[D];南京師范大學(xué);2014年

6 方倩;珠海市恙蟲(chóng)病流行病學(xué)特征及基因分型研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2014年

7 鄧艷琴;恙蟲(chóng)病東方體56kD表面抗原基因片段的克隆、表達(dá)及純化抗原在恙蟲(chóng)病抗體檢測(cè)中的應(yīng)用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2002年

8 王園園;恙蟲(chóng)病東方體56-kDa膜蛋白的原核表達(dá)及免疫原性研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2011年

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本文編號(hào)：1436553