本文關(guān)鍵詞：2009甲型H1N1流感死亡病例致病機制研究　出處：《中國疾病預(yù)防控制中心》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：流感病毒是引起呼吸道疾病最為重要的病原之一,每年在全球各個國家呈現(xiàn)季節(jié)性流行和地區(qū)性暴發(fā),據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計,每年有20-30%的兒童和5-10%的成人會遭到感染,其中300-500萬人出現(xiàn)重癥感染,約30-50萬人死亡。在2009年春季,一種新型三源重配的甲型H1N1流感病毒(2009pandemic influenza H1N1virus,2009pdmH1N1)先后在墨西哥和北美出現(xiàn)后,迅速形成了全球大流行�？傮w來說這次流感大流行的疾病嚴(yán)重程度較輕,但仍然造成了約28萬人的死亡,而且以中青年為主。那么造成這些病例死亡的主要原因是什么?本研究利用流感大流行期間收集的50例死亡病例相關(guān)信息和尸檢標(biāo)本為研究材料,通過對死亡病例的臨床資料分析、尸檢組織分子及免疫病理研究,同時結(jié)合體外實驗研究,旨在探索天然免疫系統(tǒng)和抗病毒藥物在2009年甲型H1N1重癥感染中的作用及相關(guān)機制,試圖闡明及致病機制,同時為重癥感染病例的臨床用藥提供依據(jù)。 研究內(nèi)容分以下兩部分。第一部分：天然免疫系統(tǒng)在甲型H1N1流感死亡病例中的作用及相關(guān)機制研究 我們對50例2009pdmH1N1感染死亡病例的肺組織尸檢標(biāo)本進行了宿主免疫反應(yīng)、病毒載量和組織細(xì)胞凋亡等方面進行了系統(tǒng)研究。結(jié)果顯示,1、發(fā)病后7天死亡的病例其肺組織中病毒載量最高,且最長至發(fā)病后17天死亡仍能在肺組織中檢測到病毒；2、 IL-1RA、 IL-6、 TNF-α、IL-8、 MCP-1、 MIP-1β和IP-10等7種細(xì)胞因子／趨化因子表達(dá)水平在死亡病例肺組織中明顯增高；而且IL-1RA, MCP-1, MIP-Iβ, IP-10和RANTES等細(xì)胞因子／趨化因子的mRNA表達(dá)水平與病毒載量呈正相關(guān)；3、免疫組織化學(xué)染色顯示IL-6、 IP-10和IL-8在2009pdmH1N1感染死亡病例肺組織細(xì)胞和粘膜下腺檢測到,且跟病毒抗原在組織中分布類似；4、通過TUNEL染色檢測顯示,死亡病例的肺組織存在明顯凋亡現(xiàn)象,凋亡相關(guān)基因FAS和FAS-L表達(dá)水平呈現(xiàn)倒置現(xiàn)象,2009pdmH1N1感染死亡病例的肺組織FAS基因表達(dá)明顯下調(diào),而FAS-L基因表達(dá)明顯增高且跟病毒載量成正相關(guān),此外,通過免疫組化染色顯示Cleaved caspase-3蛋白在2009pdmH1N1感染死亡病例的肺組織細(xì)胞、粘膜下腺和淋巴組織中頻繁檢測到,其在死亡病例的肺組織中的分布跟凋亡細(xì)胞的分布相似。因此,病毒的有效復(fù)制以及感染宿主的過度免疫反應(yīng)在2009pdmH1N1感染死亡病例的致病機制中起作用,凋亡是2009pdmH1N1死亡病例肺組織的病例損傷的重要表現(xiàn),而FAS-L和Caspase-3參與凋亡的發(fā)生路徑。 第二部分奧司他韋對甲型H1N1流感死亡病例的影響及初步機制研究 奧司他韋是臨床應(yīng)用最為廣泛的一種神經(jīng)氨酸酶抑制劑,但使用奧司他韋而造成的臨床副作用時有報道,且其臨床應(yīng)用策略和效果存在不同的觀點或者異議。因此奧司他韋對于2009pdmH1N1流感死亡病例的可能影響及初步機制研究是必要的。本研究將29例有明確抗病毒用藥記錄的死亡病例分為兩組：奧司他韋藥物治療組(No.=24)和無抗病毒藥物治療組(No.=5),研究奧司他韋的使用與肺組織中的病毒載量、宿主免疫反應(yīng)和凋亡發(fā)生的相關(guān)性。在此基礎(chǔ)上通過體外細(xì)胞感染模型驗證奧司他韋對病毒和感染細(xì)胞本身的影響。兩組死亡病例分析顯示,藥物治療組病例中位住院時間為發(fā)病后5天(范圍：1-12天),中位起始使用奧司他韋的時間為發(fā)病后5天(范圍1-15天),中位死亡時間為發(fā)病后9天(范圍：3-17天)；無抗病毒藥物治療組5例病例中2例病例沒有住院,另外3例病例分別在發(fā)病后3天、4天和8天住院,中位死亡時間為4天(范圍：2-8天)。對奧司他韋治療組和無抗病毒藥物治療組的死亡病例的肺組織的病毒載量、宿主免疫反應(yīng)分析和凋亡相關(guān)基因表達(dá)分析顯示,藥物治療組的病毒載量略高于無藥物治療組,但無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.39),肺組織中IL-1RA、 IL-6、 TNF-α、 IL-8、 MCP-1、 MIP-lβ、 IP-10和RANTES等細(xì)胞因子表達(dá)水平在兩組間沒有明顯差異(p0.05)。但是凋亡相關(guān)基因FASL mRNA表達(dá)水平在奧司他韋藥物治療組要明顯高于無藥物治療組(p=0.01),而TRAIL mRNA表達(dá)水平在兩組間無差異(p0.05)。分別將季節(jié)性H1N1和2009pdmH1N1流感病毒感染THP-1細(xì)胞和A-549細(xì)胞,同時設(shè)置奧司他韋藥物處理組和無藥物處理組,對兩組細(xì)胞的凋亡情況和細(xì)胞中的病毒復(fù)制動力學(xué)進行分析,結(jié)果顯示,感染0h后奧司他韋藥物處理組感染細(xì)胞內(nèi)的病毒載量明顯低于無藥物處理組感染組(p0.05),但6h和24h后藥物處理組感染細(xì)胞內(nèi)的病毒載量明顯高無藥物處理組,同時24h后奧司他韋藥物處理組的THP-1和A549細(xì)胞較無藥物處理組的細(xì)胞凋亡水平是明顯升高的(p0.05)。因此,神經(jīng)氨酸酶抑制劑奧司他韋能夠抑制流感病毒的進入,同時也能抑制病毒的釋放,但是奧司他韋能促進感染細(xì)胞的凋亡,對于重癥感染病例,目前的神經(jīng)氨酸酶抑制劑奧司他韋臨床治療策略可能并不能降低重癥感染病例肺組織中的病毒載量,且有可能可能會促進感染局部組織的病例損傷,同時可能造成體內(nèi)病毒清除的延遲。
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【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R511.7

【參考文獻】

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1 祁賢;湯奮揚;李亮;崔侖標(biāo);吳斌;祖榮強;朱鳳才;羊海濤;汪華;;新甲型H1N1(2009)流感病毒的早期分子特征[J];微生物學(xué)報;2010年01期

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本文編號：1426984