本文關鍵詞：南京地區(qū)曲霉臨床分離株體外藥物敏感性調查及煙曲霉對伊曲康唑的耐藥機制研究　出處：《南京大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：侵襲性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)是由曲霉屬感染所致,其中以煙曲霉感染最為常見,其次為黃曲霉、黑曲霉等。近年來,侵襲性曲霉病的患病率呈現(xiàn)上升趨勢,病死率居高不下,且不斷有曲霉對抗真菌藥物耐藥的報道。然而,曲霉體外藥物敏感性檢測在各個醫(yī)院并未常規(guī)開展。曲霉體外藥物敏感性試驗方法尚不統(tǒng)一,包括稀釋法、紙片擴散法、E-test法等,其中稀釋法具有準確度高、重復性好的特點。目前,稀釋法檢測曲霉體外敏感性的方法主要有兩種,分別是歐洲抗菌藥物敏感試驗委員會(European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing,EUCAST)發(fā)布的方法和美國臨床實驗室標準化協(xié)會(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)發(fā)布的方法。唑類抗真菌藥物對曲霉的作用部位在細胞膜,通過抑制14-α-去甲基酶(cyp51酶)而使得曲霉細胞膜中羊毛甾醇到麥角固醇的生物合成受阻,從而抑制曲霉生長。經研究證實,煙曲霉對唑類抗真菌藥物耐藥性的產生,大多由于cyp51A基因的突變,包括54、220等位點突變引起的獲得性耐藥機制和TR/L98H突變引起的天然耐藥機制。目前,南京地區(qū)尚缺乏曲霉臨床分離株的體外藥物敏感性相關數(shù)據(jù)。故而本研究通過收集南京地區(qū)曲霉臨床分離株,檢測其對抗真菌藥物的體外藥物敏感性,并對耐藥煙曲霉株的耐藥機制進行初步探討。研究一:南京地區(qū)曲霉臨床株體外藥物敏感性調查目的:調查南京地區(qū)曲霉臨床株對抗真菌藥物的體外藥物敏感性,并比較EUCAST和CLSI微量稀釋法檢測曲霉體外藥物敏感性的差異。材料與方法:收集南京地區(qū)5家大型教學醫(yī)院2012～2013年的曲霉臨床分離株,經菌落形態(tài)、鏡下特征及分子生物學鑒定后,10%甘油-80℃冰凍保存。分別采用EUCAST和CLSI微量稀釋法檢測所收集曲霉株對兩性霉素B、伏立康唑、伊曲康唑、卡泊芬凈和米卡芬凈的體外藥物敏感性,比較兩方法的基本符合率、藥敏符合率、重大誤差率和極重大誤差率。結果:共收集臨床曲霉分離株116株,包括煙曲霉81株、黃曲霉28株和黑曲霉7株。EUCAST和CLSI兩方法均檢測到3株煙曲霉對伊曲康唑的最小抑菌濃度(MIC)≥4μg/mL,對116株曲霉藥敏檢測的基本符合率為96.3%～100%。兩方法檢測煙曲霉對伏立康唑的藥敏符合率為98.8%,重大誤差為1.2%,極重大誤差率為0;煙曲霉和黑曲霉對兩性霉素B以及煙曲霉和黃曲霉對伊曲康唑的藥敏符合率均為100%,重大誤差率和極重大誤差率均為0。結論:南京地區(qū)存在唑類抗真菌藥物耐藥煙曲霉株,對伊曲康唑耐藥比例為3.7%;未發(fā)現(xiàn)有對兩性霉素B耐藥的曲霉株;所檢測曲霉株對卡泊芬凈和米卡芬凈均具有較低的最低有效濃度。EUCAST和CLSI微量稀釋法對曲霉體外藥物敏感性具有良好的一致性。研究二:煙曲霉對伊曲康唑的耐藥機制研究目的:研究伊曲康唑耐藥煙曲霉株的cyp51A基因突變情況。材料與方法:回顧分析伊曲康唑耐藥煙曲霉株感染患者的臨床資料。提取并擴增伊曲康唑耐藥煙曲霉株的cyp51A基因,ABI 3730XLDNA基因測序,同GenBank AF.338659煙曲霉cyp51A基因標準序列比對,以明確其突變情況。結果:三例伊曲康唑耐藥煙曲霉株感染患者均死亡。其中,一例侵襲性曲霉病患者發(fā)病前給予伊曲康唑以預防真菌感染,其cyp51A基因存在M220I突變;另外兩例患者侵襲性曲霉病發(fā)病前未給予抗真菌藥物預防治療,其cyp51A基因存在TR/L98H 突變。結論:南京地區(qū)伊曲康唑耐藥煙曲霉株的耐藥產生機制,既有天然耐藥,又有獲得性耐藥。耐藥煙曲霉株感染患者預后不良。
[Abstract]:渚佃鎬ф洸闇夌梾(invasive aspergillosis,IA)鏄敱鏇查湁灞炴劅鏌撴墍鑷，

本文編號：1418511