本文關(guān)鍵詞：雙重實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法檢測腸道病毒方法的建立及應(yīng)用　出處：《重慶醫(yī)學(xué)》2016年33期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的建立檢測腸道病毒(EV)和腸道病毒71型(EV71)的雙重實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法。方法設(shè)計(jì)特異性引物和探針,建立雙重實(shí)時(shí)熒光RT-PCR反應(yīng)體系,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,對該方法的靈敏度、精密度等進(jìn)行評價(jià)。收集109例臨床手足口病患者糞便和咽拭子標(biāo)本用該法進(jìn)行檢測,并與EV71商品化試劑盒檢測結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果雙重?zé)晒釶CR法建立的EV和EV71標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)(r)均為0.998;該法檢測EV和EV71的靈敏度分別達(dá)到0.5TCID50/mL和0.05TCID50/mL;檢測EV和EV71的批內(nèi)精密度均小于3%,總精密度均小于或等于4%;對腸道病毒及其他人類非腸道病毒進(jìn)行檢測,顯示了良好的特異性。109例臨床樣本用該法檢測出84例EV病毒陽性樣本,其中EV71陽性56例,EV71總陽性率為51.4%;與單重?zé)晒釶CR商品化試劑盒的檢測結(jié)果完全一致(P=1.000)。結(jié)論建立的雙重實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法靈敏度高、穩(wěn)定性好,對手足口病的早期高通量快速診斷具有重要意義。
[Abstract]:Objective to establish a double real-time fluorescence RT-PCR method for detecting enterovirus (EV) and enterovirus 71 (EV71). Methods specific primers and probes were designed to establish a dual real-time fluorescence RT-PCR reaction system. The standard curve was drawn up, and the sensitivity and precision of the method were evaluated. The faeces and swab specimens of 109 patients with clinical hand foot and mouth disease were collected and tested by this method. The results were compared with the results of EV71 commercial kit. The results of EV and EV71 standard curve correlation coefficient based dual fluorescent PCR method (R) was 0.998; the sensitivity of EV and EV71 detection method were respectively 0.5TCID50/mL and 0.05TCID50/mL; EV and EV71 detection in batch precision was less than 3%, the total precision is less than or equal to 4%; for enterovirus and other non human enterovirus detection showed good specificity. In 109 clinical samples, 84 cases of EV virus positive samples were detected by this method, of which 56 cases were positive for EV71, and the total positive rate of EV71 was 51.4%, which was identical with that of single fluorescent PCR commercialization Kit (P=1.000). Conclusion the dual real-time fluorescence RT-PCR method is of high sensitivity and good stability. It is of great significance for the early high throughput and rapid diagnosis of hand foot and mouth disease.
【作者單位】： 江蘇大學(xué)附屬武進(jìn)醫(yī)院檢驗(yàn)科;江蘇省南京市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：江蘇省武進(jìn)市科技發(fā)展計(jì)劃(WS201312)
【分類號】：R440;R512.5
【正文快照】： 手足口病(HFMD)是一種急性傳染病,由多種腸道病毒引起,多發(fā)生于5歲以下兒童,主要通過密切接觸或消化道傳播,基本臨床表現(xiàn)為手、足、口腔等部位出現(xiàn)皰疹,部分患者可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等多種與神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)的疾病[1]。個(gè)別重癥患兒病情發(fā)展很快,最終可能導(dǎo)致死

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本文編號：1339283