本文關(guān)鍵詞：MDR1基因與白色念珠菌毒力相關(guān)性及藥物聯(lián)用治療感染小鼠的研究

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【摘要】：目的:耐藥白色念珠菌的治療一直是臨床關(guān)注的問(wèn)題,耐藥白色念珠菌多藥耐藥基因MDR1的高表達(dá)是否引起毒力變化,也是有爭(zhēng)議的話題。利用MDR1基因高表達(dá)的耐藥白色念珠菌Ca R建立彌散性感染小鼠模型。在此基礎(chǔ)上,利用基因工程改造菌株Ca DEL(MDR1基因敲除菌株)、Ca COM-A(MDR1敲入菌株)、Ca COM-B(MDR1敲入菌株)感染小鼠,進(jìn)行MDR1基因與白色念珠菌毒力相關(guān)性研究,探討MDR1高表達(dá)是否對(duì)毒力有影響。同時(shí),開(kāi)展抗耐藥真菌藥物的篩選,建立藥物的體內(nèi)篩選系統(tǒng)。方法:將耐藥白色念珠菌Ca R尾靜脈接種免疫抑制ICR小鼠,建立彌散性感染小鼠模型,評(píng)價(jià)感染小鼠的生存狀況和平均生存時(shí)間;采集感染小鼠的腎、心、腦、肺、脾、肝組織進(jìn)行組織載菌量檢測(cè)和病理診斷;利用流式微球分析技術(shù)(CBA)檢測(cè)血液和腎組織的細(xì)胞因子IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL12p70、IL-15、IL-17、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF的變化;在此基礎(chǔ)上,利用基因工程改造菌株Ca DEL、Ca COM-A、Ca COM-B感染小鼠,評(píng)價(jià)MDR1基因?qū)π∈蠖玖Φ挠绊?以及檢測(cè)感染腎組織白色念珠菌的AFT2、CEK1、CPH1、CPP1、EFG1、FLO8 6個(gè)菌絲相關(guān)毒力因子和ALS1、ALS5、HGC1、HWP1、INT1、MNT1、PMT1、PMT6、TCC1、TEC1、TPK2、TUP1 12個(gè)粘附相關(guān)毒力因子的變化;并利用建立的耐藥白色念珠菌彌散性感染小鼠模型,口服給予氟康唑、原黃素、聯(lián)合藥物,進(jìn)行模型應(yīng)用評(píng)價(jià)研究。結(jié)果1.建立耐藥白色念珠菌彌散性感染小鼠模型CY免疫抑制ICR小鼠接種1.0×105CFU Ca R,14天內(nèi)死亡率約為90%。臨床表現(xiàn):虛弱,立毛,眼部出現(xiàn)分泌物,打轉(zhuǎn),偏頭癥狀、死亡。解剖顯示:腎組織腫大,出現(xiàn)白色斑點(diǎn),腦組織表面散布出血點(diǎn)。載菌量檢測(cè):腎、心、腦、肺、脾、肝組織都檢出白色念珠菌,腎的載菌量最高,其次是心、腦、肺、脾、肝;隨著感染時(shí)間的推移,各組織中的載菌量數(shù)逐漸減少;組織病理診斷:HE染色可見(jiàn)組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn),其中,腎組織可見(jiàn)真菌性肉芽腫病理變化;PAS染色可見(jiàn)白色念珠菌分布在各組織中。細(xì)胞因子檢測(cè):感染小鼠顯示急性非特異性炎癥反應(yīng)。血液中IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-1β與對(duì)照組相比出現(xiàn)明顯升高,其它細(xì)胞因子未見(jiàn)明顯變化;腎組織細(xì)胞因子與對(duì)照組相比,IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-15、IL-17、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF含量升高,IL-4、IL-10含量降低。2.評(píng)價(jià)MDR1基因高表達(dá)對(duì)白色念珠菌毒力的影響與MDR1基因相關(guān)的四種白色念珠菌Ca R、Ca DEL、Ca COM-A、Ca COM-B分別感染免疫抑制的ICR小鼠,均顯示典型的彌散性白色念珠菌感染,感染動(dòng)物14天內(nèi)死亡率約為90%,四組感染動(dòng)物之間生存無(wú)顯著性差異。感染第6天小鼠相關(guān)檢測(cè)結(jié)果顯示:腎、心、腦、肺、脾、肝組織載菌量無(wú)顯著性差異;組織病理診斷也無(wú)顯著差異;細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果顯示Ca DEL組與其他組相比,血液中IL-6、IL-10、TNF-α升高,腎組織中IL-1α和TNF-α升高,IL-4、IL-5、IL-6、IL-15、IL-17降低,但是這些差異性并未影響毒力;毒力因子檢測(cè)結(jié)果顯示,Ca R與Ca DEL相比,相關(guān)毒力因子均表現(xiàn)顯著性差異,然而Ca COM-A、Ca COM-B與Ca DEL相比,無(wú)顯著性差異。雖然MDR1高表達(dá)野生菌株Ca R中檢測(cè)到12種毒力基因的表達(dá)升高,但是通過(guò)敲入方式獲得的MDR1基因高表達(dá)的Ca COM-A、Ca COM-B菌株未顯示毒力基因表達(dá)差異性,因此,單一MDR1基因的高表達(dá)不能引起菌株毒力變化。3.評(píng)價(jià)藥物在耐藥白色念珠菌感染模型上的應(yīng)用利用耐藥白色念珠菌彌散性感染小鼠模型,開(kāi)展原黃素、氟康唑及聯(lián)合用藥評(píng)價(jià),結(jié)果顯示原黃素治療感染小鼠無(wú)效,8mg/kg為氟康唑治療感染小鼠的有效劑量,100mg/kg原黃素或2mg/kg氟康唑和16mg/kg原黃素聯(lián)用未見(jiàn)明顯藥效。結(jié)論:1.成功建立了耐藥白色念珠菌彌散性感染小鼠模型,并提供了動(dòng)物生存、組織載菌量、組織病理、細(xì)胞因子等指標(biāo)。2.Ca R、Ca DEL、Ca COM-A、Ca COM-B感染小鼠相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)顯示MDR1基因單一高表達(dá)不影響白色念珠菌毒力。3.8mg/kg氟康唑能有效改善耐藥白色念珠菌感染小鼠的生存,100mg/kg原黃素或2mg/kg氟康唑和16mg/kg原黃素聯(lián)用都不能有效改善感染小鼠的生存。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R519.3

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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本文編號(hào)：1258420