本文關(guān)鍵詞：特異性結(jié)合HBV EnhI的人工轉(zhuǎn)錄因子在體外抑制HBV的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的：設(shè)計(jì)可特異性識(shí)別并靶向作用于HBV增強(qiáng)子I (Enh I)的人工轉(zhuǎn)錄因子(Artificial Transcription Factor, ATF),通過(guò)ATF靶向作用于HBV Enh I來(lái)抑制HBV DNA的復(fù)制與表達(dá),為防治HBV提供新的技術(shù)方法和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：1.通過(guò)基因工程和生物信息學(xué)方法分析、對(duì)比HBV Enh I序列后確定最佳靶序列。設(shè)計(jì)能特異性結(jié)合HBV Enh I最佳靶序列的ATF并構(gòu)建其真核表達(dá)質(zhì)粒載體pcDNA3.1-ATF; 2將真核表達(dá)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,通過(guò)酶切鑒定重組質(zhì)粒的正確性,使用免疫熒光和Western-blot方法檢測(cè)ATF在真核細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況；3.將真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞,使用CCK-8檢測(cè)ATF對(duì)細(xì)胞增殖的影響,使用ELISA、qRT-PCR方法檢測(cè)ATF對(duì)HBV DNA復(fù)制與表達(dá)的抑制作用。結(jié)果：1.將pcDNA3.1-ATF轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后,使用免疫熒光和Western-blot檢測(cè)ATF蛋白能夠正常表達(dá)。2.將真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞后,通過(guò)CCK-8檢測(cè)說(shuō)明ATF對(duì)細(xì)胞增殖生長(zhǎng)無(wú)明顯的毒性作用,ELISA檢測(cè)顯示細(xì)胞中HBeAg分泌量明顯減少,熒光定量PCR檢測(cè)顯示細(xì)胞內(nèi)HBV mRNA含量減少。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)顯示細(xì)胞內(nèi)HBV DNA拷貝數(shù)明顯下降。結(jié)論：人工設(shè)計(jì)的可特異性結(jié)合于HBV Enh I的ATF在真核細(xì)胞內(nèi)正常表達(dá),在HepG2.2.15細(xì)胞中可以有效抑制HBV DNA復(fù)制與表達(dá),對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯影響。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R512.62

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李中堂;特異性結(jié)合HBV EnhI的人工轉(zhuǎn)錄因子在體外抑制HBV的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：1249352