發(fā)布時間：2017-11-19 06:11

  本文關(guān)鍵詞：萊姆病螺旋體毒力因子BmpA在刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子中的作用

  更多相關(guān)文章： 萊姆關(guān)節(jié)炎 伯氏疏螺旋體 rBmpA THP-1 ISOF 趨化因子

【摘要】：[目的]以人單核巨噬細(xì)胞(THP-1細(xì)胞)為實(shí)驗(yàn)對象,探究伯氏疏螺旋體重組膜蛋白A(recombinant Borrelia burgdorferi membrane protein A,rBmpA)刺激免疫細(xì)胞產(chǎn)生促炎趨化因子風(fēng)暴的假說及產(chǎn)生機(jī)制。并探究異佛司可林(Isoforskolin, ISOF)對rBmpA導(dǎo)致的炎癥的抑制作用。[方法]1、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)THP-1細(xì)胞,佛波酯(PMA)的作用下誘導(dǎo)成熟為巨噬細(xì)胞,加入rBmpA刺激培養(yǎng)48小時,在24小時和48小時時間點(diǎn)收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液,RayBiotech抗體芯片高通量檢測細(xì)胞上清中38種趨化因子分泌量。2、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)THP-1細(xì)胞,PMA的作用下誘導(dǎo)成熟為巨噬細(xì)胞,加入rBmpA刺激培養(yǎng)48小時,在24小時和48小時時間點(diǎn)收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液,ELISA檢測細(xì)胞上清中趨化因子CXCL13、CXCL5和CCL1的分泌量。3、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)THP-1細(xì)胞,PMA的作用下誘導(dǎo)成熟為巨噬細(xì)胞,加入rBmpA刺激培養(yǎng)48小時,在24小時和48小時時間點(diǎn)使用Trizol試劑裂解細(xì)胞并收集細(xì)胞裂解液,通過QRT-PCR檢測CXCL13、CXCL5和CCL1基因的表達(dá)水平。4、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)THP-1細(xì)胞,PMA的作用下誘導(dǎo)成熟為巨噬細(xì)胞,加入rBmpA和ISOF刺激培養(yǎng)72小時,在24小時、48小時和72小時時間點(diǎn)點(diǎn)使用Trizol試劑裂解細(xì)胞并收集細(xì)胞裂解液,通過QRT-PCR檢測炎性細(xì)胞因子IL-6及TNF-a基因的表達(dá)水平。[結(jié)果]1、在rBmpA刺激培養(yǎng)后細(xì)胞上清中,RayBiotech抗體芯片檢測的38種趨化因子中的14種趨化因子分泌量增高,從這14種中選擇CXCL13、CXCL5和CCL1做下一步研究。2、rBmpA刺激培養(yǎng)48小時后細(xì)胞上清中趨化因子CXCL13、 XCL5和CCL1的分泌量增高,高濃度rBmpA刺激后分泌量增高更多。3、rBmpA刺激培養(yǎng)24小時后細(xì)胞裂解液中趨化因子CXCL13VCXCL5和CCL1的基因表達(dá)水平增高,高濃度rBmpA刺激后基因表達(dá)水平增高更強(qiáng)。4、與rBmpA處理組相比,rBmpA+ISOF組細(xì)胞裂解液中炎性細(xì)胞因子IL-6和TNF-a基因表達(dá)水平降低。[結(jié)論]1、rBmpA刺激THP-1細(xì)胞后會導(dǎo)致THP-1細(xì)胞的14種趨化因子分泌量增高。2、rBmpA刺激THP-1細(xì)胞后會導(dǎo)致THP-1細(xì)胞分泌趨化因子CXCL13、 CXCL5和CCL1的量明顯的增加,并且更高濃度的rBmpA會導(dǎo)致THP-1細(xì)胞分泌趨化因子CXCL13、CXCL5和CCL1的量增加更多。3.rBmpA刺激THP-1細(xì)胞后會導(dǎo)致THP-1細(xì)胞內(nèi)趨化因子CXCL13、CXCL5和CCL1的基因表達(dá)量明顯的增加,并且更高濃度的rBmpA會導(dǎo)致THP-1細(xì)胞內(nèi)趨化因子CXCL13、CXCL5和CCL1的基因表達(dá)量增加更多。4、ISOF對rBmpA導(dǎo)致的THP-1細(xì)胞分泌炎性因子有明顯的抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R514

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本文編號：1202566