本文關(guān)鍵詞：萊姆病螺旋體毒力因子BmpA在刺激THP-1細胞產(chǎn)生趨化因子中的作用

  更多相關(guān)文章： 萊姆關(guān)節(jié)炎 伯氏疏螺旋體 rBmpA THP-1 ISOF 趨化因子

【摘要】：[目的]以人單核巨噬細胞(THP-1細胞)為實驗對象,探究伯氏疏螺旋體重組膜蛋白A(recombinant Borrelia burgdorferi membrane protein A,rBmpA)刺激免疫細胞產(chǎn)生促炎趨化因子風暴的假說及產(chǎn)生機制。并探究異佛司可林(Isoforskolin, ISOF)對rBmpA導(dǎo)致的炎癥的抑制作用。[方法]1、96孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)THP-1細胞,佛波酯(PMA)的作用下誘導(dǎo)成熟為巨噬細胞,加入rBmpA刺激培養(yǎng)48小時,在24小時和48小時時間點收集細胞培養(yǎng)上清液,RayBiotech抗體芯片高通量檢測細胞上清中38種趨化因子分泌量。2、96孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)THP-1細胞,PMA的作用下誘導(dǎo)成熟為巨噬細胞,加入rBmpA刺激培養(yǎng)48小時,在24小時和48小時時間點收集細胞培養(yǎng)上清液,ELISA檢測細胞上清中趨化因子CXCL13、CXCL5和CCL1的分泌量。3、96孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)THP-1細胞,PMA的作用下誘導(dǎo)成熟為巨噬細胞,加入rBmpA刺激培養(yǎng)48小時,在24小時和48小時時間點使用Trizol試劑裂解細胞并收集細胞裂解液,通過QRT-PCR檢測CXCL13、CXCL5和CCL1基因的表達水平。4、96孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)THP-1細胞,PMA的作用下誘導(dǎo)成熟為巨噬細胞,加入rBmpA和ISOF刺激培養(yǎng)72小時,在24小時、48小時和72小時時間點點使用Trizol試劑裂解細胞并收集細胞裂解液,通過QRT-PCR檢測炎性細胞因子IL-6及TNF-a基因的表達水平。[結(jié)果]1、在rBmpA刺激培養(yǎng)后細胞上清中,RayBiotech抗體芯片檢測的38種趨化因子中的14種趨化因子分泌量增高,從這14種中選擇CXCL13、CXCL5和CCL1做下一步研究。2、rBmpA刺激培養(yǎng)48小時后細胞上清中趨化因子CXCL13、 XCL5和CCL1的分泌量增高,高濃度rBmpA刺激后分泌量增高更多。3、rBmpA刺激培養(yǎng)24小時后細胞裂解液中趨化因子CXCL13VCXCL5和CCL1的基因表達水平增高,高濃度rBmpA刺激后基因表達水平增高更強。4、與rBmpA處理組相比,rBmpA+ISOF組細胞裂解液中炎性細胞因子IL-6和TNF-a基因表達水平降低。[結(jié)論]1、rBmpA刺激THP-1細胞后會導(dǎo)致THP-1細胞的14種趨化因子分泌量增高。2、rBmpA刺激THP-1細胞后會導(dǎo)致THP-1細胞分泌趨化因子CXCL13、 CXCL5和CCL1的量明顯的增加,并且更高濃度的rBmpA會導(dǎo)致THP-1細胞分泌趨化因子CXCL13、CXCL5和CCL1的量增加更多。3.rBmpA刺激THP-1細胞后會導(dǎo)致THP-1細胞內(nèi)趨化因子CXCL13、CXCL5和CCL1的基因表達量明顯的增加,并且更高濃度的rBmpA會導(dǎo)致THP-1細胞內(nèi)趨化因子CXCL13、CXCL5和CCL1的基因表達量增加更多。4、ISOF對rBmpA導(dǎo)致的THP-1細胞分泌炎性因子有明顯的抑制作用。
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R514

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本文編號：1202566