本文關(guān)鍵詞：石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌臨床分離株基因分型及耐藥性分析

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【摘要】：目的:對(duì)石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌臨床分離株進(jìn)行基因分型研究和藥物敏感性試驗(yàn),分析了石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌基因多態(tài)性和分子流行病學(xué)特征,及石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的耐藥情況以及耐藥菌株基因分型特征,有助于對(duì)石家莊地區(qū)結(jié)核病的流行發(fā)展趨勢(shì)的充分了解,為結(jié)核病的有效防治提供科學(xué)依據(jù)。方法:收集2014年1月至2014年10月期間在石家莊市第五醫(yī)院就診的結(jié)核病患者經(jīng)臨床分離培養(yǎng)得到的結(jié)核分枝桿菌菌株及相應(yīng)病例背景資料,采用PNB/TCH初步鑒別法和多位點(diǎn)PCR(Multi-locus PCR)進(jìn)行菌種鑒定。采用比例法進(jìn)行一線抗結(jié)核藥(鏈霉素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇)的藥物敏感性試驗(yàn)。應(yīng)用間隔區(qū)寡核苷酸基因分型(Spoligotyping)和15位點(diǎn)數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列分析(VNTR)進(jìn)行菌株的基因分型。運(yùn)用Bio Numerics 5.0軟件進(jìn)行聚類(lèi)分析,運(yùn)用SPSS16.0軟件進(jìn)行Hunter-Gaston分辨指數(shù)(HGDI)計(jì)算和卡方檢驗(yàn)(計(jì)數(shù)資料)、t檢驗(yàn)(計(jì)量資料)等數(shù)據(jù)分析。結(jié)果:1收集到石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性共373株,經(jīng)過(guò)PNB/TCH和多位點(diǎn)PCR實(shí)驗(yàn)證實(shí)為結(jié)核分枝桿菌有367株和非結(jié)核分枝桿菌6株。2間隔區(qū)寡核苷酸基因分型法(Spoligotyping)367株結(jié)核分枝桿菌呈現(xiàn)明顯的基因多態(tài)性。通過(guò)比對(duì)Spol DB4.0數(shù)據(jù)庫(kù),可分為2個(gè)基因群,即北京家族(Beijing family)和非北京家族(Non-Beijing family),分別占91.3%(335/367)和5.7%(21/367)。有11株(3.0%)的基因型不能被Spol DB4.0數(shù)據(jù)庫(kù)所識(shí)別,可能為新的基因型。北京家族菌株中99.4%(333/335)為典型北京家族(Typical Beijing family),表現(xiàn)為僅與35~43之間的9個(gè)間隔區(qū)呈現(xiàn)陽(yáng)性雜交反應(yīng);其余菌株在35~43之間有1~4個(gè)位點(diǎn)呈現(xiàn)陰性雜交反應(yīng),稱為非典型北京家族(Atypical Beijing family)或北京樣基因型(Beijing-like family)。非北京家族菌株表現(xiàn)出高度的基因多態(tài)性,包括T基因型,占66.7%(14/21);MANU基因型,占14.3%(3/21);LAM基因型,占14.3%(3/21);H基因型,占4.7%(1/21)。經(jīng)Bio Numerics軟件聚類(lèi)分析,全部29種基因型包含10個(gè)簇和147種獨(dú)特基因型(單一菌株類(lèi)型)。其中最大的一個(gè)簇含331株(90.2%),為北京家族基因型。Spoligotyping對(duì)所有菌株的HGDI值為0.2486。3數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列分析(VNTR)經(jīng)Bio Numerics軟件聚類(lèi)分析,367株結(jié)核分枝桿菌可分為194種VNTR基因型,其中221(60.22%)株菌可被聚類(lèi)為48個(gè)簇,146(39.78%)種基因型為獨(dú)特基因型;335株北京家族菌株呈現(xiàn)161種VNTR基因型,其中219(65.37%)株可聚為45個(gè)簇,116(34.63%)為獨(dú)特基因型。VNTR對(duì)所有菌株的HGDI值為0.9838,VNTR和Spoligotyping聯(lián)合使用時(shí),HDGI值為0.9853。4石家莊地區(qū)2014年結(jié)核分枝桿菌的總耐藥率為31.61%(116/367),其中初始耐藥率為24.47%(69/282),獲得性耐藥率為55.29%(47/85)。獲得性耐藥率明顯高于初始耐藥率,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=28.71,P0.05)。耐藥株中,單耐藥36株,占9.80%;耐多藥或耐兩種以上藥物的多耐藥菌株80株,占21.81%。5根據(jù)聚類(lèi)分析結(jié)果,將367株結(jié)核分枝桿菌分為成簇類(lèi)型和單一類(lèi)型(非成簇類(lèi)型);根據(jù)藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果,將367株結(jié)核分枝桿菌按照敏感和耐藥分類(lèi)。結(jié)果顯示:敏感菌株和耐藥菌株在成簇類(lèi)型和單一類(lèi)型的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.084,P=0.773)。成簇類(lèi)型和單一類(lèi)型差異在性別、年齡、職業(yè)、治療史和耐藥情況等方面均不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值均0.05)。結(jié)論:1石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌的基因型存在明顯的多態(tài)性,其最主要流行菌株是北京家族型,發(fā)現(xiàn)了11株新的Spoligotyping基因型,可進(jìn)一步完善Spoligotyping數(shù)據(jù)庫(kù)的菌株信息。2 VNTR-15基因分型法的分辨能力高于Spoligotyping基因分型法的分辨能力,聯(lián)合使用VNTR-15和Spoligotyping的分辨能力更高。提示聯(lián)合采用Spoligotyping和VNTR這兩種分型方法能夠全面分析結(jié)核分枝桿菌的基因多態(tài)性。本研究采用的15個(gè)VNTR位點(diǎn)適合石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌基因分型研究。3石家莊地區(qū)2014年結(jié)核分枝桿菌的總耐藥率和初始耐藥率與全國(guó)平均水平持平,但獲得性耐藥率處于較高水平。提示石家莊地區(qū)結(jié)核耐藥狀況比較嚴(yán)重,需進(jìn)一步加強(qiáng)耐藥結(jié)核人群的監(jiān)測(cè)和管理,提高患者治療依從性。同時(shí)應(yīng)規(guī)范臨床抗生素的使用,降低獲得性耐藥的發(fā)生率。4在所有菌株中,成簇類(lèi)型和單一類(lèi)型菌株在不同的性別、年齡、職業(yè)和治療史中的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示結(jié)核菌的廣泛傳播和流行可能與目前尚未發(fā)現(xiàn)的因素相關(guān),仍需進(jìn)一步深入探索和研究。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R52;R446.5

【參考文獻(xiàn)】

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