本文關(guān)鍵詞：gp10基因的原核表達(dá)及其聯(lián)用異煙肼的體外抗結(jié)核菌活性

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【摘要】：目的構(gòu)建分枝桿菌噬菌體D29 gp10基因重組質(zhì)粒,在E. coli BL21(DE3)中表達(dá)重組蛋白gp10,檢測其單用及聯(lián)用異煙肼的體外抗結(jié)核菌活性,為開發(fā)結(jié)核病新藥提供新的方向。方法1.以分枝桿菌噬菌體D29基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增gp10基因,克隆至原核表達(dá)載體pET32a(+),構(gòu)建重組質(zhì)粒pET32a(+)-gp10,經(jīng)雙酶切和測序鑒定正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至E.coli BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白gp10。經(jīng)SDS-PAGE鑒定后,采用鎳柱純化及透析復(fù)性目的蛋白。2.利用2倍微量稀釋法原理,刃天青顯色法檢測重組蛋白gp10對結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv和臨床分離耐多藥株的最低抑菌濃度。利用7x7微量棋盤稀釋法的原理,刃天青顯色法觀察重組蛋白gp10與異煙肼聯(lián)用針對H37Rv的部分抑菌濃度指數(shù)。結(jié)果1.gp10基因經(jīng)PCR擴(kuò)增獲得長1479bp的條帶,重組質(zhì)粒pET32a(+)-gp10經(jīng)EcoR I和Not I雙酶切獲得長約5900和1479 bp的條帶,測序結(jié)果與GenBank中查找的gp10基因序列完全一致,并表達(dá)相對分子質(zhì)量75.2 KDa的融合蛋白。2.重組蛋白gp10對結(jié)核分枝桿菌H37Rv和臨床分離耐多藥株的最低抑菌濃度為256 μg/ml,與異煙肼聯(lián)用對結(jié)核分枝桿菌H37Rv部分抑菌濃度指數(shù)為0.5。結(jié)論1.成功構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET32a(+)-gp10,并在E.coli BL21(DE3)中表達(dá)gp10蛋白。2.重組蛋白gp10單用對體外結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37RV和臨床分離耐多藥株均表現(xiàn)出一定抗菌活性,聯(lián)用異煙肼表現(xiàn)出協(xié)同抗菌效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R52

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本文編號：1164346