本文關(guān)鍵詞：艾滋病脾腎陽虛證和熱毒蘊結(jié)證差異microRNA表達(dá)的相關(guān)性研究

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【摘要】：背景本課題組前期已采用基因芯片技術(shù)完成艾滋病期脾腎陽虛證、熱毒蘊結(jié)證患者和健康志愿者microRNA表達(dá)譜的檢測。脾腎陽虛證組與健康對照組比較,篩選出表達(dá)有顯著性差異(P0.05)的microRNA共89條,其中52條上調(diào)(58%),37條下調(diào)(42%),GO富集分析發(fā)現(xiàn)其證候生物學(xué)基礎(chǔ)可能與自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用,T細(xì)胞活化中的IL-15、IL-6受體的作用,細(xì)胞凋亡,轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-p)等相關(guān)；熱毒蘊結(jié)證組與健康對照組比較,篩選出表達(dá)有顯著性差異(P0.05)的microRNA共100條,其中64條上調(diào)(64%),36條下調(diào)(36%),GO富集分析發(fā)現(xiàn)其證候生物學(xué)基礎(chǔ)可能與T細(xì)胞活化中的IL-21受體的作用,C反應(yīng)蛋白,血小板,氧化應(yīng)激等相關(guān)。目的探討艾滋病期脾腎陽虛證和熱毒蘊結(jié)證與差異microRNA表達(dá)的相關(guān)性,以期發(fā)現(xiàn)艾滋病上述兩證型的microRNA特異性表達(dá)特征,探索其形成的生物學(xué)基礎(chǔ),為艾滋病中醫(yī)證候診斷的客觀化提供實驗依據(jù)。方法本研究選取前期芯片篩選結(jié)果中艾滋病期脾腎陽虛證組、熱毒蘊結(jié)證組分別和正常對照組相比較表達(dá)具有顯著差異的microRNA各9條,其中5條microRNA在兩證型中共有(脾腎陽虛證目的基因：hsa-let-7b-5p、hsa-miR-15b-5p、 hsa-miR-19b-3p、hsa-miR-30e-5p、hsa-miR-106b-5p、hsa-miR-144-3p、 hsa-miR-144-5p、hsa-miR-320a、hsa-miR-320c;熱毒蘊結(jié)證目的基因:hsa-let-7b-5p、 hsa-let-7f-1-3p、hsa-let-7g-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-144-3p、 hsa-miR-320a、hsa-miR-320c、hsa-miR-3940-5p、兩證型共有的目的基因：hsa-let-7b-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-320a、hsa-miR-320c)。運用實時熒光定量PCR技術(shù)(Quantitative Real-time PCR, qRT-PCR)對采集的艾滋病期脾腎陽虛證、熱毒蘊結(jié)證患者和健康志愿者的標(biāo)本進(jìn)行上述目的microRNA表達(dá)量的檢測,以U6為內(nèi)參物進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化,采用2-ΔCT值來表示目的基因的相對表達(dá)量。運用SPSS V20.0統(tǒng)計軟件分析目的microRNA在艾滋病期脾腎陽虛證組、熱毒蘊結(jié)證組和正常對照組的差異表達(dá)。結(jié)果1、脾腎陽虛證組與正常對照組比較：hsa-miR-19b-3p、hsa-miR-15b-5p、 hsa-miR-30e-5p、hsa-miR-106b-5p、hsa-miR-144-5p在艾滋病期脾腎陽虛證組表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),與芯片篩選結(jié)果相一致。hsa-let-7b-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-320a在艾滋病期脾腎陽虛證組表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；hsa-miR-320c在艾滋病期脾腎陽虛證組表達(dá)下調(diào),但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。這4條microRNA的表達(dá)下調(diào)與基因芯片篩選結(jié)果表達(dá)上調(diào)不相吻合。2、熱毒蘊結(jié)證組與正常對照組比較：hsa-let-7g-5p、hsa-miR-126-3p在艾滋病期熱毒蘊結(jié)證組表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),與芯片篩選結(jié)果相一致。hsa-miR-15b-5p在艾滋病期熱毒蘊結(jié)組表達(dá)下調(diào),其下調(diào)趨勢與芯片篩選結(jié)果相一致,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。hsa-let-7b-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-320a、hsa-miR-320c、hsa-miR-3940-5p在艾滋病期熱毒蘊結(jié)證組表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；hsa-let-7f-1-3p在艾滋病期熱毒蘊結(jié)組表達(dá)下調(diào),但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。這6條microRNA的表達(dá)下調(diào)與芯片篩選結(jié)果表達(dá)上調(diào)不相吻合。3、hsa-let-7b-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-320a、hsa-miR-320c的表達(dá)在艾滋病期脾腎陽虛證組和熱毒蘊結(jié)證組之間無明顯變化,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論1、hsa-miR-19b-3p、hsa-miR-30e-5p、hsa-miR-106b-5p、hsa-miR-144-5p的qRT-PCR驗證結(jié)果與芯片篩選結(jié)果相一致,表明這4條microRNA與艾滋病期脾腎陽虛證具有一定的相關(guān)性。本研究結(jié)果提示以上4條microRNA可以作為艾滋病期脾腎陽虛證的生物標(biāo)志物,其涉及的IL-6、自然殺傷細(xì)胞活化、TGF-β、腫瘤壞死因子(TNF-α)等免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)的調(diào)控可能是艾滋病期脾腎陽虛證形成的生物學(xué)基礎(chǔ)。2、hsa-let-7g-5p、hsa-miR-126-3p的qRT-PCR驗證結(jié)果與芯片篩選結(jié)果相一致,表明這2條microRNA與艾滋病期熱毒蘊結(jié)證具有一定的相關(guān)性。本研究結(jié)果提示以上2條microRNA可以作為艾滋病期熱毒蘊結(jié)證的生物標(biāo)志物,其涉及的細(xì)胞凋亡、內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)功能和免疫應(yīng)答等生物學(xué)過程的調(diào)控可能是艾滋病期熱毒蘊結(jié)證形成的生物學(xué)基礎(chǔ)。3、hsa-let-7b-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-320a在艾滋病期脾腎陽虛證、熱毒蘊結(jié)證組的表達(dá)均較正常對照組出現(xiàn)差異,且在兩證型間表達(dá)無差異,本研究結(jié)果提示其可能在艾滋病的病理生理過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用,可以作為潛在的艾滋病生物標(biāo)志物進(jìn)一步深入研究。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R512.91

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1 ;流行性腮腺炎診療技術(shù)[N];中國中醫(yī)藥報;2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 曾紹謙;基于iTRAQ技術(shù)的艾滋病熱毒蘊結(jié)證與脾腎陽虛證的蛋白組學(xué)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 邢靜;艾滋病熱毒蘊結(jié)證與脾腎陽虛證差異蛋白質(zhì)表達(dá)的研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 周瑜雨;艾滋病脾腎陽虛證和熱毒蘊結(jié)證差異microRNA表達(dá)的相關(guān)性研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2015年

4 馮廣帥;艾滋病脾腎陽虛證與熱毒蘊結(jié)證的mRNA差異表達(dá)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2014年

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本文編號：1141821