本文關(guān)鍵詞：人G1型輪狀病毒TaqMan熒光定量檢測方法的建立與應(yīng)用

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【摘要】：目的本研究旨在建立一種快速準(zhǔn)確定量檢測人G1型輪狀病毒的TaqMan探針熒光實時PCR檢測方法。方法以輪狀病毒VP6基因為靶基因,分別設(shè)計2對引物及其相應(yīng)的TaqMan探針,擴增目的片段,將目的片段克隆于PCDNA3.1+載體上,體外轉(zhuǎn)錄獲得RNA,系列稀釋后為標(biāo)準(zhǔn)品,建立TaqMan探針熒光定量實時PCR檢測方法并對該方法進行驗證。結(jié)果設(shè)計實驗找到最優(yōu)條件下的引物濃度(250nmol/L)、探針濃度(300nmol/L);通過對引起腹瀉的人柯薩奇病毒、呼腸孤病毒等進行檢測,結(jié)果均為陰性,表明該方法具有很好的特異性。該方法的最低檢測量為5copies/μL。對該方法進行重復(fù)性實驗,發(fā)現(xiàn)變異率均小于1%,重復(fù)性好。用已建立的方法對4份糞便臨床樣品進行3次重復(fù)試驗,病毒RNA的檢出率為100%。結(jié)論本實驗初步建立了人G1型輪狀病毒TaqMan探針熒光實時PCR檢測方法,為G1型輪狀病毒的診斷、檢測和分子流行病學(xué)研究提供了一種新的方法。
【作者單位】： 昆明理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院昆明理工大學(xué)附屬醫(yī)院;昆明理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院云南省分子醫(yī)學(xué)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 人輪狀病毒 VP基因 TaqMan熒光定量PCR
【基金】：國家科技支撐計劃項目(No.2014BAI01B01)~~
【分類號】：R440;R512.5
【正文快照】： (1.The Affiliated Hospital of Kunming University of Science and Technology,Kunming650034,China2.Kunming University of Science and technology,faculty of life science and technology,Yunnan Provincial research center of molecular medicine,Kunming650034,Chin

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本文編號：1123537