本文關(guān)鍵詞：一步反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)在檢測(cè)4種人瘧原蟲(chóng)中的初步應(yīng)用

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【摘要】：目的探討應(yīng)用一步反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)4種人瘧原蟲(chóng)的可行性和特異性。方法取惡性瘧(1例)、間日瘧(1例)、卵形瘧(1例)和三日瘧(5例)患者全血,提取瘧原蟲(chóng)總RNA和基因組DNA。應(yīng)用一步RT-PCR和一步實(shí)時(shí)熒光RT-PCR分別擴(kuò)增經(jīng)脫氧核糖核酸酶(DNase)消化的瘧原蟲(chóng)RNA樣品中的18S rRNA序列,應(yīng)用普通PCR和一步RT-PCR技術(shù)分別擴(kuò)增不同稀釋濃度的瘧原蟲(chóng)RNA(未經(jīng)DNase消化和經(jīng)DNase消化)和DNA樣品中的瘧原蟲(chóng)18S rRNA序列和18S r DNA序列,比較2種檢測(cè)技術(shù)可檢測(cè)到目標(biāo)序列的樣品最低稀釋濃度。結(jié)果患者全血基因組DNA經(jīng)一步RT-PCR分別擴(kuò)增出310、394和323 bp條帶,測(cè)序結(jié)果顯示分別為惡性瘧原蟲(chóng)(Plasmodium falciparum)、卵形瘧原蟲(chóng)(P.ovale)和間日瘧原蟲(chóng)(P.vivax)的18S rRNA序列特異性條帶,但未擴(kuò)增出三日瘧原蟲(chóng)(P.malariare)特異條帶。一步實(shí)時(shí)熒光RT-PCR結(jié)果顯示,4種人瘧原蟲(chóng)RNA樣品均出現(xiàn)相應(yīng)的熒光信號(hào),除三日瘧原蟲(chóng)樣品外,各溶解曲線均僅有單一的擴(kuò)增峰。因4種人瘧原蟲(chóng)DNA和RNA原液樣品中模板量的差異,一步RT-PCR可檢測(cè)到的最低稀釋濃度從1至10-4不等,但可檢測(cè)到的DNA樣品的最低稀釋濃度與未經(jīng)DNase消化的RNA樣品相同或較后者低一個(gè)數(shù)量級(jí),且兩者最低稀釋濃度均低于經(jīng)DNase消化的RNA樣品。與普通PCR的檢測(cè)結(jié)果比較發(fā)現(xiàn),同一樣品均以一步RT-PCR可檢測(cè)到的稀釋濃度最低,較普通PCR的敏感性提高10~1 000倍。結(jié)論一步RT-PCR技術(shù)可檢測(cè)出人血液樣品中的惡性瘧原蟲(chóng)、卵形瘧原蟲(chóng)和間日瘧原蟲(chóng)DNA,但在檢測(cè)三日瘧原蟲(chóng)樣品中的適用性有待進(jìn)一步分析。
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲(chóng)病預(yù)防控制所 世界衛(wèi)生組織熱帶病合作中心 科技部國(guó)家級(jí)熱帶病國(guó)際聯(lián)合中心 衛(wèi)生部寄生蟲(chóng)病原與媒介生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;上海市疾病預(yù)防控制中心;安徽省疾病預(yù)防控制中心;
【關(guān)鍵詞】： 反轉(zhuǎn)錄PCR 瘧原蟲(chóng) 核糖體小亞基
【基金】：寄生蟲(chóng)病預(yù)防控制所防治技術(shù)儲(chǔ)備科研基金(No.CB-15006)~~
【分類號(hào)】：R531.3
【正文快照】： 隨著瘧疾發(fā)病率的持續(xù)下降,分子技術(shù)因其在檢測(cè)瘧原蟲(chóng)中的重要作用被逐漸推廣并應(yīng)用于低瘧區(qū)或無(wú)瘧區(qū)瘧疾檢測(cè)[1]。該法大多基于瘧原蟲(chóng)屬(Plasmodium)及屬內(nèi)不同種類原蟲(chóng)的小核糖體亞基基因(SSU r RNA或18S r RNA)保守區(qū)和種特異區(qū)序列而設(shè)計(jì)[2]。但同一種瘧原蟲(chóng)基因組中含有

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【相似文獻(xiàn)】

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