本文關(guān)鍵詞：HIV抗體實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略研究

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【摘要】：研究背景艾滋病是由人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起的一種傳染率高且造成極大疾病負(fù)擔(dān)的傳染病。至今尚無(wú)確切、有效的藥物可以治愈。自美國(guó)1981年診斷出第一例艾滋病患者以來(lái)：,艾滋病病毒感染率居高不下。2014年全球已報(bào)告3700萬(wàn)艾滋病毒攜帶者,120萬(wàn)人死于艾滋病。目前我國(guó)艾滋病病毒感染者和艾滋病病人約占總?cè)丝诘?.06%,即約每1萬(wàn)人中可能有6人感染了HIV病毒。截至2015年10月底,全國(guó)報(bào)告存活的艾滋病病毒感染者和病人共計(jì)57.5萬(wàn)例,死亡17.7萬(wàn)人。為有效控制艾滋病流行傳播,制訂適合我國(guó)國(guó)情的HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略,對(duì)艾滋病的疫情監(jiān)測(cè)、診斷和治療有重要意義。目前HIV的檢測(cè)方法有抗體檢測(cè)、抗原檢測(cè)和病毒核酸檢測(cè)。其中檢測(cè)HIV抗體的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、快速試驗(yàn)(Rapid test, RT)、蛋白印跡試驗(yàn)(Western Blot, WB)、重組免疫印跡試驗(yàn)(Recombinant Immunoblot Assay, RIBA)、化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)(chemiluminescence immunoassay, CIA)或免疫熒光試驗(yàn)(immunofluorescence assay, IFA)、明膠顆粒凝集試驗(yàn)(gelatin-particle agglutination test, PA)等；HIV特異抗原檢測(cè)方法為ELISA;檢測(cè)HIV病毒核酸的方法為聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction)、核酸序列擴(kuò)增試驗(yàn)、分支DNA擴(kuò)增試驗(yàn)等。由于不同檢測(cè)方法的敏感性和特異性有差別,臨床需要組合不同的試驗(yàn)方法,制定不同的檢測(cè)策略,以最低的檢測(cè)成本達(dá)到最優(yōu)的檢測(cè)效果：。研究目的1、評(píng)價(jià)三類不同原理的人類免疫缺陷病毒抗體診斷方法。2、針對(duì)不同的檢測(cè)人群提出并驗(yàn)證HIV抗體的檢測(cè)策略。研究方法本研究分兩部分進(jìn)行,第一部分為三種原理HIV抗體檢測(cè)方法學(xué)評(píng)估,應(yīng)用六種血清盤(即基礎(chǔ)血清盤、干擾樣本血清盤、線性稀釋系列血清盤、精密度血清盤、美國(guó)病理學(xué)家協(xié)會(huì)(CAP)能力驗(yàn)證血清盤以及商業(yè)陽(yáng)轉(zhuǎn)血清盤)對(duì)三種類型(HIV抗體快速檢測(cè)方法、HIV抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法、HIV抗體免疫印跡檢測(cè)方法)的診斷方法的臨床敏感性、臨床特異性、分析靈敏度、分析特異性及精密度等指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。評(píng)估診斷方法的整體性能,為后期檢測(cè)策略的提出提供數(shù)據(jù)支持。第二部分研究,基于第一部分的評(píng)估結(jié)果(三種原理HIV抗體檢測(cè)方法學(xué)的敏感性和特異性等指標(biāo)),同時(shí),由于HIV抗體檢測(cè)方法中快速檢測(cè)和酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法應(yīng)用最廣,所以基于該兩種原理的方法提出檢測(cè)策略。將快速檢測(cè)和酶聯(lián)免疫診斷方法進(jìn)行順序排列組合,驗(yàn)證單一試劑檢測(cè)策略、雙試劑檢測(cè)策略、三種試劑檢測(cè)策略。研究對(duì)象：1.方法學(xué)評(píng)估選取六種血清盤即基礎(chǔ)血清盤、干擾樣本血清盤、線性稀釋系列血清盤、精密度血清盤、美國(guó)病理學(xué)家協(xié)會(huì)(CAP)能力驗(yàn)證血清盤以及商業(yè)陽(yáng)轉(zhuǎn)血清盤。其中基礎(chǔ)血清盤由40份陽(yáng)性樣本和40份陰性樣本組成；干擾樣本血清盤由15份HBsAg抗體陽(yáng)性樣本、15份梅毒抗體陽(yáng)性樣本以及10份HCV抗體陽(yáng)性樣本組成；線性稀釋系列血清盤由3組強(qiáng)陽(yáng)性混合樣本倍比稀釋系列組成；精密度血清盤由參比室精密度質(zhì)控品組成,共3支,分高中低三個(gè)HIV抗體滴度；商業(yè)陽(yáng)轉(zhuǎn)血清盤共10套,購(gòu)自美國(guó)SeraCare公司。CAP能力驗(yàn)證血清盤共10支,其中6支HIV抗體陽(yáng)性,4支HIV抗體陰性。2.策略評(píng)估選取HIV和HCV哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)樣本,共991份。包括甘肅MSM人群184份、云南吸毒人群165份、安徽丙肝陽(yáng)性人群178份、福建VCT人群398份、近期感染者10人樣本(66份)。研究結(jié)果：第一部分人類免疫缺陷病毒抗體診斷方法學(xué)評(píng)價(jià)1.敏感性與特異性：A試劑(酶免法、國(guó)產(chǎn)單獨(dú)抗體檢測(cè)試劑1)、B試劑(酶免法、國(guó)產(chǎn)單獨(dú)抗體檢測(cè)試劑2)、C試劑(酶免法、國(guó)產(chǎn)抗原抗體聯(lián)合檢測(cè))、D試劑(酶免法、進(jìn)口抗原抗體聯(lián)合檢測(cè))、E試劑(金標(biāo)法、國(guó)產(chǎn)單獨(dú)抗體檢測(cè))、F試劑(膠體硒法、進(jìn)口單獨(dú)抗體檢測(cè)),六種試劑應(yīng)用基礎(chǔ)血清盤評(píng)估,敏感性均40/40,特異性介于39/40～40/40。2.精密度：A-D酶免法檢測(cè)試劑板內(nèi)精密度分別為,高抗體滴度質(zhì)控品檢測(cè)精密度cv%值介于6.27%～12.89%；中抗體滴度質(zhì)控品檢測(cè)精密度cv%值介于4.40%～11.29%；低抗體滴度質(zhì)控品檢測(cè)精密度cv%值介于4.740%～24.98%。3.分析靈敏度：各試劑檢測(cè)出陽(yáng)性結(jié)果相比核酸檢測(cè)出陽(yáng)性的延長(zhǎng)天數(shù)平均值介于7～11.8天,D試劑(酶免法、進(jìn)口抗原抗體聯(lián)合檢測(cè))最短7天,WB試劑最長(zhǎng)為11.8天數(shù)。4. RIBA與WB比較：應(yīng)用RIBA和WB分別對(duì)商業(yè)陽(yáng)轉(zhuǎn)盤進(jìn)行檢測(cè)。WB檢測(cè)結(jié)果有3份陽(yáng)性,14份不確定,49份陰性；RIBA檢測(cè)結(jié)果有11份陽(yáng)性、10份不確定、45份陰性。對(duì)商業(yè)陽(yáng)轉(zhuǎn)盤進(jìn)行檢測(cè),RIBA陽(yáng)性樣本檢出數(shù)多于WB,檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行配對(duì)X2檢驗(yàn),P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Kappa值為0.70。5.分析特異性：A試劑(酶免法、國(guó)產(chǎn)單獨(dú)抗體檢測(cè)試劑1)、B試劑(酶免法、國(guó)產(chǎn)單獨(dú)抗體檢測(cè)試劑2)、C試劑(酶免法、國(guó)產(chǎn)抗原抗體聯(lián)合檢測(cè))、D試劑(酶免法、進(jìn)口抗原抗體聯(lián)合檢測(cè))、E試劑(金標(biāo)法、國(guó)產(chǎn)單獨(dú)抗體檢測(cè))、F試劑(膠體硒法、進(jìn)口單獨(dú)抗體檢測(cè)),六種試劑應(yīng)用干擾樣本血清盤評(píng)估,分析特異性均為40/40。第二部分人類免疫缺陷病毒感染診斷的檢測(cè)策略評(píng)價(jià)1.單一試劑檢測(cè)策略：分別應(yīng)用RT1(快速檢測(cè)、膠體硒法)、RT2(快速檢測(cè)、膠體金法)、RT3(快速檢測(cè)、膠體金法)、ELISA3(酶免法、單獨(dú)抗體檢測(cè))、ELISA4(酶免法、抗原抗體聯(lián)合檢測(cè))單次檢測(cè)991份樣本。(1)總?cè)巳簷z測(cè)結(jié)果敏感性介于96.55%-99.31%,特異性介于98.84%～99.87%,符合率介于98.59%～99.35%。ELISA4(酶免法、抗原抗體聯(lián)合檢測(cè))敏感性最高為99.31%,RT3(快速檢測(cè)、膠體金法)特異性最高為99.87%。(2)各人群(自愿咨詢檢測(cè)人群、吸毒人群、丙肝抗體陽(yáng)性人群、男男人群)分別檢測(cè)統(tǒng)計(jì),敏感性介于80%(4/5)-100%,特異性介于97.69%-100%,符合率介于97.58%～100%。2.酶免法初篩、快速法確證的雙試劑檢測(cè)策略：分別應(yīng)用ELISA4→RT1、ELISA4→RT2、ELISA4→RT3策略,對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)。(1)總?cè)巳簷z測(cè),三種組合敏感性介于96.55%～97.24%。特異性均為99.87%100%,符合率均為99.46%。(2)各人群(自愿咨詢檢測(cè)人群、吸毒人群、丙肝抗體陽(yáng)性人群、男男人群)分別檢測(cè)統(tǒng)計(jì),敏感性介于80%(4/5)-100%,特異性介于99.72%～100%。符合率介于98.18%～00%。3.快速法初篩、酶免法確證的雙試劑檢測(cè)策略：分別應(yīng)用RT1→ELISA4、RT1→ELISA3組合策略,對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)。(1)總?cè)巳簷z測(cè),RT1→ELISA4組合敏感性為97.24%、特異性為99.87%、符合率為99.46%。RT1→ELISA3組合敏感性為96.55%,特異性為100%,符合率99.46%。(2)各人群(自愿咨詢檢測(cè)人群、吸毒人群、丙肝抗體陽(yáng)性人群、男男人群)分別檢測(cè)統(tǒng)計(jì),RT1→ELISA4組合敏感性介于94.87%～100%,特異性介于99.72%-100%,符合率介于98.79%～100%；RT1→ELISA3組合敏感性介于94.87%～100%,特異性均為100%,符合率介于98.18%～100%。4.快速法初篩、快速法確證的雙試劑檢測(cè)策略：分別應(yīng)用RT1→RT2、RT1→RT3策略,對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)。(1)總?cè)巳簷z測(cè),兩種組合敏感性、特異性、符合率相同,分別為96.55%、100%、99.46%。(2)各人群(自愿咨詢檢測(cè)人群、吸毒人群、丙肝抗體陽(yáng)性人群、男男人群)分別檢測(cè)統(tǒng)計(jì),敏感性介于80%(4/5)-100%,特異性均為100%,符合率介于98.18%～100%。5.酶免法初篩、酶免法確證的雙試劑檢測(cè)策略：分別應(yīng)用ELISA4→ELISA3組合策略進(jìn)行檢測(cè),總?cè)巳好舾行詾?6.55%,特異性為99.74%,符合率為99.24%。各人群分別統(tǒng)計(jì)敏感性介于94.87%～100%,特異性介于99.42%～100%,符合率介于98.18%-100%。6.三試劑檢測(cè)策略：RT1→RT2→RT3組合進(jìn)行檢測(cè),總?cè)巳红`敏度為95.86%,特異性為100%,,符合率為99.35%；自愿咨詢檢測(cè)人群敏感性為94.87%,特異性為100%,符合率為99.50%；吸毒人群檢測(cè)敏感性為96.30%,特異性為100%,符合率為98.18；丙肝抗體陽(yáng)性人群檢測(cè)敏感性為80%(4/5),特異性為100%,符合率為99.44%；男男人群檢測(cè),該組合的敏感性、特異性、符合率均為100%。7.近期感染樣本檢測(cè)策略：近期感染樣本檢測(cè)結(jié)果,RT1、RT2、RT3、ELISA3、ELISA4分別檢出13、12、11份、12份、22份陽(yáng)性結(jié)果。ELISA4檢出22份陽(yáng)性樣本,分析靈敏度最高。ELISA4→WB組合確證3份陽(yáng)性、14份不確定；ELISA4→PCR組合確證22份陽(yáng)性。研究結(jié)論：1.參與評(píng)價(jià)的ELISA診斷方法與快速診斷方法均有較高的敏感性和特異性,抗原抗體檢測(cè)方法敏感性相對(duì)較高,更適合作為抗體篩查方法。2.4種ELISA檢測(cè)方法板內(nèi)精密度差別較大,檢測(cè)低抗體滴度質(zhì)控品時(shí),精密度值跨度最大,可能會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。3.作為HIV抗體確證方法,RIBA與WB相比分析靈敏度較高,不確定率低,減少了由于不確定帶來(lái)的隨訪率,確證急性感染的檢驗(yàn)效能較高。4.應(yīng)用單試劑檢測(cè)策略對(duì)人群樣本進(jìn)行檢測(cè),均存在假陰性和假陽(yáng)性的情況。5.應(yīng)用雙試劑檢測(cè)策略對(duì)各人群檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果的特異性增加,約為100%,但是在自愿咨詢檢測(cè)樣本中存在假陽(yáng)性的情況。6.三種快速法組合檢測(cè)策略與兩種檢測(cè)方法組合檢測(cè)策略比較,特異性方面沒(méi)有差異,敏感性降低。7.近期感染樣本應(yīng)用ELISA抗原抗體檢測(cè)試劑與核酸組合檢測(cè),檢測(cè)效率較高,可以有效縮短窗口期。
【關(guān)鍵詞】：人類免疫缺陷病毒 HIV抗體 HIV抗原 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 重組免疫印跡試驗(yàn) 蛋白免疫印跡試驗(yàn) 陽(yáng)轉(zhuǎn)血清 近期感染 方法學(xué)評(píng)價(jià) 檢測(cè)策略
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R512.91;R446.6
【目錄】：

• 縮寫詞表4-7
• 摘要7-13
• ABSTRACT13-19
• 前言19-26
• 第一部分 人類免疫缺陷病毒抗體診斷方法學(xué)評(píng)價(jià)26-37
• 1 材料與方法26-31
• 1.1 材料26-28
• 1.2 方法28-31
• 2 結(jié)果31-35
• 2.1 能力驗(yàn)證血清盤評(píng)價(jià)人員能力結(jié)果31
• 2.2 敏感性及特異性31
• 2.3 分析靈敏度31-33
• 2.4 RIBA與WB的檢測(cè)結(jié)果比較33
• 2.5 分析特異性33
• 2.6 板內(nèi)精密性33-34
• 2.7 線性范圍34-35
• 3 討論35-36
• 4 結(jié)論36-37
• 第二部分 人類免疫缺陷病毒感染診斷的檢測(cè)策略評(píng)價(jià)37-52
• 1 材料與方法37-40
• 1.1 試驗(yàn)樣本37
• 1.2 樣本納入標(biāo)準(zhǔn)37
• 1.3 試劑37-38
• 1.4 檢測(cè)方法38-39
• 1.5 儀器及耗材39-40
• 1.6 評(píng)估方法40
• 1.7 評(píng)價(jià)指標(biāo)40
• 1.8 質(zhì)量控制40
• 2 結(jié)果40-49
• 2.1 單一試劑檢測(cè)策略40-42
• 2.2 酶免法初篩,快速法確證的雙試劑檢測(cè)策略42-44
• 2.3 快速法初篩,酶免法確證的雙試劑檢測(cè)策略44-46
• 2.4 快速法初篩,快速法確證的雙試劑檢測(cè)策略46-47
• 2.5 酶免法初篩,酶免法確證的雙試劑檢測(cè)策略47-48
• 2.6 三試劑檢測(cè)策略48
• 2.7 近期感染樣本檢測(cè)策略48-49
• 3 討論49-51
• 4 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-54
• 附表54-67
• 已發(fā)表文章67-76
• 致謝76-77
• 個(gè)人簡(jiǎn)介77-78

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本文編號(hào)：1002384