本文關(guān)鍵詞：衣原體噬菌體衣殼蛋白Vp1對(duì)豚鼠結(jié)膜炎衣原體及沙眼衣原體的作用研究

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【摘要】：沙眼衣原體泌尿生殖道感染是世界上最常見(jiàn)的性傳播疾病。隨著細(xì)菌耐藥性及持續(xù)感染問(wèn)題的產(chǎn)生,沙眼衣原體感染的治療變得愈來(lái)愈棘手,加之衣原體的特殊生物學(xué)特性,臨床治療失敗的例子越來(lái)越多。衣原體疫苗的研究尚未取得滿意的結(jié)果。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外的研究開(kāi)始轉(zhuǎn)向衣原體噬菌體,我們前期的相關(guān)研究表明,作為第二個(gè)被發(fā)現(xiàn)的衣原體噬菌體,豚鼠結(jié)膜炎衣原體噬菌體phiCPG1的衣殼蛋白Vp1能抑制D、E型沙眼衣原體及臨床株的生長(zhǎng),因此,我們推測(cè)Vp1蛋白可能具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。本研究旨在進(jìn)一步探討Vp1蛋白對(duì)鸚鵡熱衣原體標(biāo)準(zhǔn)株豚鼠結(jié)膜炎衣原體(GPIC)、沙眼衣原體標(biāo)準(zhǔn)株D,E,F,G,H,I,K以及L2株的作用。[目的]探討衣原體噬菌體衣殼蛋白Vp1對(duì)豚鼠結(jié)膜炎衣原體(GPIC)及D,E,F,G,H,I,K及L2這8型沙眼衣原體的作用,觀察其對(duì)豚鼠結(jié)膜炎衣原體及不同型沙眼衣原體的生長(zhǎng)抑制情況。為臨床上解決沙眼衣原體的感染提供新的治療方向。[方法]用不斷優(yōu)化的重組質(zhì)粒在大腸埃希菌內(nèi)大量表達(dá)衣原體噬菌體Vp1蛋白,收集、鑒定及純化。將純化后的Vp1蛋白與豚鼠結(jié)膜炎衣原體及不同型的沙眼衣原體室溫孵育3小時(shí),接種至單層致密Hela細(xì)胞(或McCoy細(xì)胞)中,在衣原體的培養(yǎng)過(guò)程中加入不同濃度的Vp1蛋白,根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線變化確定Vp1蛋白的最佳作用濃度,在衣原體的換液、離心、孵育過(guò)程中加入最佳作用濃度的Vp1蛋白,免疫熒光或碘染色計(jì)數(shù)包涵體。同時(shí)采用液體培養(yǎng)基稀釋法檢測(cè)Vp1蛋白對(duì)其它病原體如金黃色葡萄球菌、鏈球菌、肺炎克雷伯桿菌、白色念珠菌生長(zhǎng)的影響。[結(jié)果]經(jīng)體外重組表達(dá)的衣原體噬菌體衣殼蛋白Vp1對(duì)豚鼠結(jié)膜炎衣原體及沙眼衣原體均有明顯的抑制作用,作用濃度為51.2ug/ml,其對(duì)豚鼠結(jié)膜炎衣原體的抑制率約為80.2%,沙眼衣原體標(biāo)準(zhǔn)株D,E,F,G,H,I,K及L2生長(zhǎng)的抑制率分別約為82.7%,78.0%,83.6%,76.9%,69.8%,75.7%,79.2%,86.7%,這一結(jié)果暗示Vp1蛋白對(duì)沙眼衣原體各株具有普遍的抑制作用。Vp1蛋白對(duì)生殖道其它常見(jiàn)病原體如對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯桿菌、鏈球菌及白色念珠菌的生長(zhǎng)抑制作用不明顯。[結(jié)論]本實(shí)驗(yàn)室體外重組表達(dá)的衣原體噬菌體衣殼蛋白Vp1對(duì)豚鼠結(jié)膜炎衣原體及不同型的沙眼衣原體的生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用,而對(duì)其它病原體作用不明顯。本實(shí)驗(yàn)首次探索了衣原體噬菌體衣殼蛋白Vp1對(duì)豚鼠結(jié)膜炎衣原體及不同型沙眼衣原體的作用。為臨床上沙眼衣原體感染的治療提供了新的方向。
【關(guān)鍵詞】：衣原體噬菌體 Vp1蛋白 豚鼠結(jié)膜炎衣原體 沙眼衣原體 抑制作用
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R374
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-12
• 前言12-17
• 研究現(xiàn)狀、成果12-16
• 研究目的、方法16-17
• 一、衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1的表達(dá)、鑒定與純化及其對(duì)豚鼠結(jié)膜炎衣原體的抑制作用17-29
• 1.1 對(duì)象和方法17-22
• 1.1.1 菌株、細(xì)胞株、豚鼠結(jié)膜炎衣原體17
• 1.1.2 試劑及液體配制17
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法17-22
• 1.2 結(jié)果22-24
• 1.2.1 Vp1蛋白的表達(dá)、鑒定及純化22-23
• 1.2.2 Vp1蛋白對(duì)豚鼠結(jié)膜炎的作用檢測(cè)23-24
• 1.3 討論24-28
• 1.3.1 Vp1蛋白的表達(dá)、純化及鑒定25-26
• 1.3.2 對(duì)照組的選擇26
• 1.3.3 Vp1作用濃度的確定26
• 1.3.4 Vp1蛋白對(duì)豚鼠結(jié)膜炎衣原體的抑制作用26-28
• 1.4 小結(jié)28-29
• 二、Vp1蛋白對(duì)不同型沙眼衣原體的抑制作用29-40
• 2.1 對(duì)象和方法29-30
• 2.1.1 細(xì)胞株、沙眼衣原體標(biāo)準(zhǔn)株29
• 2.1.2 沙眼衣原體培養(yǎng)所需試劑、液體配制29
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法29-30
• 2.2 結(jié)果30-34
• 2.2.1 Vp1蛋白對(duì)不同型沙眼衣原體的抑制作用30-34
• 2.2.2 Vp1蛋白對(duì)其它病原體的抑制作用34
• 2.3 討論34-39
• 2.3.1 沙眼衣原體的基因組學(xué)及多樣性35-36
• 2.3.2 Vp1蛋白對(duì)不同型沙眼衣原體的作用36-39
• 2.4 小結(jié)39-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明45-46
• 綜述 沙眼衣原體的進(jìn)化46-59
• 綜述參考文獻(xiàn)54-59
• 致謝59-60
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷60

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