病毒性肝炎是我國的常見、多發(fā)病,其中乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染是導(dǎo)致肝細(xì)胞癌的主要危險(xiǎn)因子之一。乙型肝炎病毒變異性高,其基因組包括四個(gè)開放閱讀框(C、P、S、X),其中HBx編碼的蛋白是一種多功能性蛋白,為病毒基因組轉(zhuǎn)錄所必需,在乙型肝炎病毒的復(fù)制、細(xì)胞生長、DNA修復(fù)及凋亡過程中起重要作用。因此,對HBx進(jìn)行深入研究具有極其重要的理論和臨床意義。 細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫應(yīng)答的核心成分,通過受體與帶有CTL表位即抗原肽的MHC-I類分子互相作用,溶解、殺傷靶細(xì)胞�？乖氖强乖心鼙幻庖呒�(xì)胞特異性識(shí)別的線性片段或空間構(gòu)象性結(jié)構(gòu),是引起免疫應(yīng)答和免疫反應(yīng)的基本單位,在機(jī)體免疫中發(fā)揮關(guān)鍵的作用,抗原表位的選擇也是能否獲得特異性抗體的關(guān)鍵。由于HBx表位可以被不同的MHC-Ⅰ類分子所識(shí)別、遞呈,在這些MHC-Ⅰ類分子中,中國人群中HLA-A2陽性的人群高達(dá)50%,因此對HLA-A0201限制性的CTL表位進(jìn)行研究具有更大的現(xiàn)實(shí)意義。 迄今為止,HBV被分為八個(gè)不同的基因型(A-H),以及眾多的血清型。我們選擇了中國人群中最常見B基因型中的adw血清型和C基因型中的adr血清型的基因序列作為研究對象,分別通過三個(gè)提供表位預(yù)測服務(wù)的網(wǎng)絡(luò)站點(diǎn),以及超基序、延展基序和量化基序等方案預(yù)測獲得4條九肽作為候選表位(HBx1:VLCLRPVGA、HBx2:CLFKDWEEL、HBx3:VLHKRTLGL、HBx4:HLSLRGLPV)。由于預(yù)測結(jié)合并不等于實(shí)際結(jié)合,并且實(shí)際結(jié)合也并不意味著真正具有免疫原性,所以有必要通過體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)對預(yù)測表位的結(jié)合能力、免疫原性進(jìn)行進(jìn)一步的免疫學(xué)鑒定。為此,我們根據(jù)文獻(xiàn)分別選擇了陽性肽(HBc:FLPSDFFPSI)以及陰性肽(HBc,HLA-A2402:EYLVSFGVW)作為陽性、陰性參照。 T2細(xì)胞作為一種免疫學(xué)研究的工具,其表面空載的HLA-A0201分子表達(dá)極不穩(wěn)定,而外源性抗原肽的結(jié)合能夠提高HLA-A0201分子的穩(wěn)定性,因此我們通過T2細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)和結(jié)合穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)檢測各候選表位與HLA-A0201分子結(jié)合的親和力、穩(wěn)定性,四條候選表位中HBx2的親和力和穩(wěn)定性最高。 為了進(jìn)一步檢測各候選表位在體內(nèi)環(huán)境中的免疫原性,我們以HLA-A2.1/kb轉(zhuǎn)基因鼠為模型,模擬體內(nèi)環(huán)境,對四條候選表位刺激脾細(xì)胞釋放IFN-γ的能力和誘導(dǎo)的肽特異性CTL的細(xì)胞殺傷能力進(jìn)行了檢測,四條候選表位中HBx2同樣表現(xiàn)出較高的刺激脾細(xì)胞釋放IFN-γ和誘導(dǎo)的肽特異性CTL的細(xì)胞殺傷的能力。之后我們分離了HLA-A0201陽性慢性活動(dòng)期乙肝病人外周血中的單個(gè)核細(xì)胞,通過檢測HBx2和各對照肽體外刺激單個(gè)核細(xì)胞分泌IFN-γ的能力和誘導(dǎo)的肽特異性CTL的細(xì)胞殺傷能力,對HBx2的免疫原性作進(jìn)一步的鑒定。根據(jù)體內(nèi)、體外鑒定的結(jié)果,我們利用HBx2構(gòu)建了可溶性的肽-四聚體,為將該表位進(jìn)一步應(yīng)用于臨床診斷和治療鋪平了道路。 綜上所述,HBx2(CLFKDWEEL)是一個(gè)潛在的HBx來源的HLA-A0201限制性CTL表位,具備應(yīng)用于臨床診斷、治療的可能性。我們的研究為進(jìn)一步深入探討HBx在乙肝和乙肝導(dǎo)致的肝細(xì)胞癌中的作用以及慢性乙肝、肝細(xì)胞癌的診斷、治療研究打下了良好的基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R373

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 ;Hepatitis B Virus Down-Regulates Expressions of MHC Class I Molecules on Hepatoplastoma Cell Line[J];Cellular & Molecular Immunology;2006年05期

2 董海龍,隋延仿,葉菁,李增山,曲萍,張秀敏,陳廣生,祿韶英;腫瘤抗原MAGE-n HLA-A2限制性細(xì)胞毒性T細(xì)胞表位的預(yù)測及合成鑒定[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2003年12期

3 ;Expression of nuclear factor-KB in hepatocellular carcinoma and its relation with the X protein of hepatitis B virus[J];World Journal of Gastroenterology;2001年03期

本文編號(hào)：2026876