本文關(guān)鍵詞：活化型肝星狀細(xì)胞中miRNA下調(diào)Gremlin1表達(dá)的調(diào)控機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：miRNA在控制發(fā)育進(jìn)程、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡以及器官發(fā)育等扮演著關(guān)鍵性角色，本課題組前期研究確認(rèn)了下調(diào)Gremlin1的表達(dá)可抑制HSC-T6的活化，進(jìn)而逆轉(zhuǎn)CCL4誘導(dǎo)的SD大鼠肝纖維化模型的纖維化進(jìn)程。本課題的研究目的主要是篩選并確認(rèn)HSC-T6中下調(diào)Gremlin1表達(dá)的miRNA，以及該miRNA抑制HSC活化的能力。 方法：（1）運(yùn)用生物信息學(xué)軟件篩選出可能下調(diào)Gremlin1表達(dá)的miRNA；（2）用熒光素酶報(bào)告基因分析法將Gremlin1的mRNA的3′-UTR全長及部分片段轉(zhuǎn)染HSC-T6，通過熒光素酶的活性篩選下調(diào)Gremlin1表達(dá)的miRNA的結(jié)合區(qū)域；（3）結(jié)合生物信息學(xué)軟件和熒光素酶報(bào)告基因分析法篩選可能下調(diào)Gremlin1表達(dá)的miRNA；（4）合成篩選出的miRNA Mimic，將其轉(zhuǎn)染HSC-T6中，通過western blot方法驗(yàn)證miRNA對Gremlin1的下調(diào)作用，以及對肝纖維化相關(guān)基因（膠原蛋白、TGF-β、α-SMA）表達(dá)的影響。 結(jié)果：（1）運(yùn)用生物信息學(xué)軟件篩選出可能下調(diào)Gremlin1表達(dá)的6種保守miRNA；（2）用熒光素酶報(bào)告基因分析法篩選出下調(diào)Gremlin1表達(dá)的miRNA的結(jié)合區(qū)；（3）結(jié)合生物信息學(xué)軟件和熒光素酶報(bào)告基因分析法篩選可能下調(diào)Gremlin1表達(dá)的保守miRNA有：miR-23a/b、miR-27a/b、miR-181a/b/c/d和miR-182；（4）合成篩選出的miRNA Mimic，轉(zhuǎn)染HSC-T6后，確認(rèn)了miR-23b-3p、miR-27b和miR-182能下調(diào)HSC-T6中Gremlin1的表達(dá)；miR-181b-1-3p能下調(diào)Collα1和Col1α2的表達(dá)；（5）miR-27b既能下調(diào)HSC-T6中Gremlin1的表達(dá)，又能下調(diào)HSC-T6中α-SMA、TGF-β、Col1α1和Col1α2的表達(dá)。 結(jié)論：Gremlin1通過調(diào)節(jié)BMP-7/TGF-β-Smad信號通路，對HSC的活化起著促進(jìn)作用，下調(diào)Gremlin1的表達(dá)可抑制HSC的活化，miR-27b、miR-23b-3p和miR-182能下調(diào)Gremlin1的表達(dá)；miR-27b能抑制HSC的活化。
【關(guān)鍵詞】：miRNA Gremlin1 肝星狀細(xì)胞 肝纖維化
【學(xué)位授予單位】：三峽大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575.2;R-332
【目錄】：

• 內(nèi)容摘要4-5
• Abstract5-8
• 英文縮略詞表8-9
• 引言9-12
• 材料與方法12-23
• 結(jié)果23-44
• 第一部分:生物信息學(xué)分析可能下調(diào) Gremlin1 表達(dá)的 miRNA23
• 第二部分:熒光素酶報(bào)告基因分析法確定下調(diào) Gremlin1 表達(dá)的 miRNA結(jié)合區(qū)23-35
• 第三部分:結(jié)合生物信息學(xué)和熒光素酶報(bào)告基因分析法篩選出可能下調(diào)Gremlin1 表達(dá)的 miRNA35-36
• 第四部分:確認(rèn)肝星狀細(xì)胞中能夠下調(diào) Gremlin1 表達(dá)的 miRNA 及其抑制HSC 活化的能力36-44
• 討論44-46
• 小結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 綜述49-62
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 后記62-63
• 附錄63

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本文編號：417525