對串聯(lián)風疹病毒(Rubella virus,RV) 3個結構蛋白6個免疫顯性區(qū)域進行制備(命名為B103),并將其應用于血清學診斷中。選取RV C aa 1–30&aa 96–123、E2 aa 31–105和E1 aa 11–39&aa 154–277&aa 389–412等6個免疫顯性區(qū)域,將其串聯(lián)并基因合成;將此基因片段插入TRX和His標簽之間構建表達質粒;蛋白B103在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導表達,并利用Streamline Chelating親和層析和DEAE陰離子交換層析純化目的蛋白,Sephadex G-25分子篩分析其折疊情況及均一性;利用免疫印跡技術對蛋白B103的抗原性進行鑒定,并建立RV-IgM抗體捕獲法ELISA檢測技術,初步評價此方法對陰陽血清樣本的鑒別能力。蛋白B103以可溶性形式表達,其表達量約占菌體總蛋白的18.57%,經純化后蛋白B103濃度為3.026 mg/mL,純度為95.35%;免疫印跡實驗表明蛋白B103能與RV急性期血清發(fā)生反應;對40份RV急性期血清及40份RV陰性血清進行檢測發(fā)現(xiàn)可以很好地鑒別陰陽性血清...

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圖1B103表達質粒示意圖Fig.1SchematicdiagramofB103expressionplasmids.

端為His標簽，連接臂為GGGSGGGS，以及合適的酶切位點(如NdeⅠ、NcoⅠ和XhoⅠ等)。B103F基因片段大小約800bp，構建好的表達質粒經測序、雙酶切鑒定及小量表達證實構建成功，命名為B103質粒。小量表達SDS-PAGE結果發(fā)現(xiàn)，目的蛋白分子量與預期相同，約為44....

圖3蛋白B103凝膠過濾分析Fig.3GelfiltrationanalysisofB103protein.

主要分布于200mmol/LNaCl洗脫液中，純度為95.35%，濃度為3.026mg/mL(圖2B)。經過凝膠過濾層析發(fā)現(xiàn)(圖3)，純化后的蛋白B103存在于單一洗脫峰中，峰尖而且分布優(yōu)異表明其成分均一性優(yōu)異，折疊成熟，可以作為檢測抗原應用于ELISA檢測中。2.2蛋白B103....

圖5蛋白B103在RV感染血清學診斷效果評價Fig.5TheevaluationofthediagnosticeffectofproteinB103onRVinfection.

ISSN1000-3061CN11-1998/Q生物工程學報ChinJBiotechhttp://journals.im.ac.cn/cjbcn1534圖5蛋白B103在RV感染血清學診斷效果評價Fig.5Theevaluationofthediagnosticeffectofp....

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