目的利用人源抗狂犬病病毒ScFv噬菌體抗體庫,構(gòu)建單克隆抗體(單抗)輕、重鏈質(zhì)粒,瞬時(shí)表達(dá),純化后驗(yàn)證具有高中和活性的單抗。方法以從ScFv噬菌體抗體庫中篩選獲得特異性抗體為模板,PCR擴(kuò)增抗體輕、重鏈可變區(qū)序列,構(gòu)建人源全分子抗體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒;輕、重鏈質(zhì)�；旌虾筠D(zhuǎn)染HEK293 EBNA1細(xì)胞,瞬時(shí)表達(dá)全分子抗體。采用Mabselect SuRe介質(zhì)手動(dòng)親和純化抗體,Nano Vue超微量分光光度計(jì)測定蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度,快速熒光灶抑制試驗(yàn)(rapid fluorescent focus inhibition test, RFFIT)進(jìn)行體外中和效價(jià)驗(yàn)證。結(jié)果成功構(gòu)建22個(gè)輕鏈質(zhì)粒,15個(gè)重鏈質(zhì)粒。通過真核細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)后,經(jīng)手動(dòng)親和純化后,獲得22株單抗。除1株抗體外,其余21株抗體的蛋白質(zhì)量濃度均>300μg/mL;部分抗體純度均在90%以上。中和活性結(jié)果顯示,5株在1 500～1 800 IU/mg之間;8株在800～1 500 IU/mg之間;7株在500～800 IU/mg之間;其余2株在500 IU/mg以下。結(jié)論成功構(gòu)建并驗(yàn)證獲得20株中和活性>500 IU/m...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 毒種、細(xì)胞
    1.2 抗RV噬菌體抗體庫
    1.3 主要試劑及儀器
    1.4 目的基因的擴(kuò)增及產(chǎn)物的鑒定
    1.5 單抗輕、重鏈質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.5.1 質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.5.2 質(zhì)粒的驗(yàn)證
    1.6 單抗輕、重鏈質(zhì)粒序列分析
    1.7 HEK293-EBNA1細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
    1.8 單抗的親和純化
    1.9 抗RV單抗效價(jià)檢測
    1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié) 果
    2.1 目的基因的擴(kuò)增及產(chǎn)物的鑒定
    2.2 單抗輕、重鏈質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.1 抗RV單抗輕、重鏈序列及載體的酶切
        2.2.2 抗RV單抗輕、重鏈質(zhì)粒序列驗(yàn)證
    2.3 抗RV單抗輕、重鏈質(zhì)粒序列分析
    2.4 輕、重鏈質(zhì)粒的質(zhì)量濃度
    2.5 抗RV單抗的蛋白質(zhì)量濃度
    2.6 抗RV單抗純度測定
    2.7 抗RV單抗的體外中和效價(jià)
        2.7.1 病毒株80%感染量測定
        2.7.2 抗體中和活性
3 討 論



本文編號：3903132