為保證人用豬源性生物制品的的質(zhì)量和安全性，有必要對潛在污染的相關(guān)病毒進行檢測。本論文旨在建立豬細(xì)小病毒(PPV)的分子生物學(xué)及血清學(xué)檢測方法，并對相關(guān)生物材料進行檢測。 通過GeneBank查出所有已發(fā)表的PPV基因組序列，其它細(xì)小病毒科細(xì)小病毒屬病毒及其它豬源性病毒基因組序列，利用DNAStar軟件進行序列同源性分析，利用Primer primier5.0及Oligo6.0引物設(shè)計軟件按照引物設(shè)計原則設(shè)計一對針對PPV的特異引物，能夠擴增出一條531bp的特異片段，經(jīng)方陣滴定法確定了PCR檢測的最佳條件，經(jīng)過寡核苷酸探針對PCR產(chǎn)物進行斑點雜交鑒定，并對特異片段連接pGEM-T-easy載體，通過對于重組質(zhì)粒測序結(jié)果進行軟件分析證明為PPV的特異片段。對已知TICD₅₀為10^3.6的病毒培養(yǎng)物提取模板以10倍等級倍比稀釋，進行PCR擴增，以鑒定PCR方法的敏感性，我們建立的PCR方法所能檢測的最小TCID₅₀值為0.398。通過對來自北京各大屠宰場的豬源性臟器及建立的PPV—豬腎組織混合感染PK-15細(xì)胞模型進...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1一3上毒前后PK一15上毒后的P-K15細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)對比

中國藥品生物制品檢定所碩士研究生論文實驗結(jié)果一、PPV于PK一15細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果(見圖1一3)未上毒的正常P-K15細(xì)胞圖1一3上毒前后PK一15上毒后的P-K15細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)對比正常PK一15細(xì)胞為梭形，規(guī)則，上毒后的PK一15細(xì)胞呈隆起、固縮、溶解等病變。二、Reod一Mu....

圖1一5Mg++濃度滴定結(jié)果

8、1.ommol/L/10017、2.smmol/L/10一39、1.smmol幾/10一318、2.smmol/L/10一22、引物濃度的優(yōu)化:(見圖1一6)分設(shè)0.05umol/L、0.1umol/L、0.2umol/L、0.3umol/L、0.4umol幾、0.5umol....

圖1一7TaqDNA聚合酶滴定結(jié)果

中國藥品生物制品檢定所碩士研究生論文123456789lOlll2l3l4l5l6l7l8l9202l22232425圖1一6引物濃度滴定結(jié)果l、0.05umol/L/10一310、0.2umol/L/10一219、0.4umol/L/10，l2、0.05umol/L/10一21....

圖1一6引物濃度滴定結(jié)果

8、0.1umol/L/10017、0.4umol/L/10一39、0.2umol/L/10一318、0.4umol/L/10一23、TaqDNA聚合酶用量的優(yōu)化:(見圖1一7)分設(shè)l.SU、2.0U、2.5U、3.0U、3.5U五個梯度，其中以2.5一3.5U均可擴增出目的片段....

本文編號：3903652