目的構(gòu)建真菌通用的RNA干擾載體,以廣泛用在多種真菌基因干擾的研究中。方法利用現(xiàn)有的植物雙元表達(dá)載體進(jìn)行改造,將pBlueScriptⅡ的多克隆位點(diǎn)（MCS）酶切下來(lái)構(gòu)建干擾載體;為使載體適于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化,加入T-DNA邊界重復(fù)序列;為便于轉(zhuǎn)化后的篩選,將潮霉素抗性基因構(gòu)建到干擾載體上。改造以前的干擾載體僅適于青霉菌屬的RNA干擾,為擴(kuò)大干擾范圍,擴(kuò)增pSilent-1質(zhì)粒中的真菌通用啟動(dòng)子Ptrpc,間隔序列和終止子Ttrpc,并引入潮霉素抗性基因,使其在間隔序列兩側(cè)加上目的基因的正反向干擾序列以構(gòu)建載體。結(jié)果利用本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的載體PCB309-PSUST及優(yōu)化的反應(yīng)體系成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)孢子絲菌STE20基因的有效干擾,操作簡(jiǎn)便、轉(zhuǎn)化效率高、轉(zhuǎn)化子穩(wěn)定。結(jié)論成功構(gòu)建的這種載體適于根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo),能夠?qū)Χ喾N絲狀真菌基因進(jìn)行RNA干擾研究用。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
2 結(jié) 果
    2.1 RNA干擾載體pCB309-PSUST的構(gòu)建
3 討 論


【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]組氨酸激酶在馬爾尼菲青霉菌中的功能研究[D]. 王峰.沈陽(yáng)藥科大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3709218