研究目的：在本所建立和優(yōu)化人類精漿蛋白提取方法，建立較窄pH梯度（pH4-7）二維電泳圖譜和液化各個時間點寬pH梯度（pH3-10）二維電泳圖譜。利用差異蛋白質組學的方法分析精漿蛋白在液化過程中各種蛋白的變化規(guī)律，初步探討其在精液液化和男性生殖中的作用。材料：隨機選取13名身體健康并排除遺傳病史，年齡在20—30歲之間，且精液確定已使AID病人受孕并分娩了正常的嬰兒的供精者，所有供精者都簽署了供精知情同意書。所有供精者在標本采集前后微生物感染檢查均為陰性。收集正常男性精漿標本，取不液化、液化10min、30min、60min以及鏡下精液液化時等幾個時間點的精漿蛋白。方法：1．比較TCA/丙酮沉淀蛋白抽提法和超濾/變性蛋白抽提法提取蛋白的優(yōu)劣，選取和優(yōu)化提取效率較高的蛋白抽提法提取蛋白。2．二維電泳技術分離蛋白點并利用差異蛋白質組學方法比較不同液化時間的精漿蛋白進行差異分析。3．比較臨床檢測鏡下水平液化時的精漿蛋白二維電泳圖譜與各時段精漿蛋白二維電泳圖譜。4．MALDI-TOF質譜鑒定所獲得的發(fā)生變化的蛋白點進行生物信息學分析。結果：1．比較了兩種二維電泳蛋白提取方法，結果顯示TCA/丙... 

【文章來源】：中南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

精液液化速率測定裝置

之內;(4)每管加入500pl沉淀液(preeipitant)，并短暫振蕩，室溫下孵育3分鐘;(5)每管加入500pl共沉淀液(eo一preeipitant)，并短暫振蕩混勻;(6)100009離心10分鐘，以沉淀蛋白質;(7)小心倒去管中的液體，避免將沉淀的蛋白質打散;(8)再次短暫離心各管，將管壁上的殘余液體離心至管底，用移液器吸去底的液體，使沒有可見的液體殘留;(9)每管加入100pl銅離子溶液(coppersolution)和400pl純水，速振蕩，使沉淀的蛋白質重新溶解;(10)每管加入lml顯色工作液，立即顛倒混勻;(11)在室溫下孵育20分鐘;(12)每管吸取200pl至96孔板中，以純水為對照，在波長490nm處讀吸光值。該步驟應在加入顯色工作液后40分鐘內完成;(13)繪制標準曲線，計算直線回歸方程，算出待測樣品的蛋白濃度。

圖3TCA抽提超濾/變性抽提Marker圖32.使用精液液化速率測定裝置測定所幾個時間段的精液液化率液為凝固狀態(tài)，無法通過濾過膜;其平均液化水瓶蓋在10分為50士5%，30分鐘時精液的液化率達到92%以上，還有少量過。}精液液化率一時間圖}

【參考文獻】：
期刊論文
[1]人精液液化速率的簡易定量測定術及其方法學評價[J]. 張智廣,韓咪莎,林蕓秀,江一平.  福建醫(yī)科大學學報. 2006(06)
[2]利用H4和SAX-2蛋白質芯片技術篩查少精子癥患者精漿標志物[J]. 楊歡,張杰,張煒,龍文,張孝斌.  中華男科學雜志. 2006(01)



本文編號：3360124