目的探討以改構(gòu)腺相關(guān)病毒2型（AAV-2）為載體,將rAAV/CEA轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞（Dendritic cell,DC）制備肺癌治療性疫苗的可行性。方法取健康人外周血,分離獲得貼壁的單個(gè)核細(xì)胞（Mo）,以rAAV/CEA病毒轉(zhuǎn)染,對(duì)照組以CEA多肽刺激,兩組細(xì)胞均以重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）、白細(xì)胞介素4（IL-4）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）誘導(dǎo)DC成熟。第7天收集DC,取DC與原始T細(xì)胞混合,誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）,[3H]-TdR摻入法檢測(cè)DC刺激自體T細(xì)胞增殖能力;流式細(xì)胞儀分析CTL細(xì)胞中IL-4、IFN-γ、CD8、CD4、CD69、CD25的表達(dá)情況;取CEA陽性的肺癌細(xì)胞株A549為靶細(xì)胞,采用51Cr釋放法檢測(cè)CTL對(duì)該靶細(xì)胞的殺傷效率。結(jié)果 rAAV/CEA轉(zhuǎn)染的DC疫苗可誘導(dǎo)特異性細(xì)胞免疫,具體表現(xiàn)在:⑧疫苗具備較強(qiáng)的刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力,⑧誘導(dǎo)的CTL較高表達(dá)CD8、CD69和IFN-γ,⑧對(duì)CEA陽性的肺癌靶細(xì)胞產(chǎn)生較強(qiáng)殺傷活性,且此活性具有抗原特異性和MHC-I類限制性。結(jié)論以AAV為載體,rAAV/CEA基因轉(zhuǎn)染DC可成功... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2014,34(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 重組病毒的構(gòu)建
    1.2 主要試劑
    1.3 主要儀器
    1.4 人外周血DC的培養(yǎng)
    1.5 CTL的誘導(dǎo)
    1.6 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)
    1.7 FACS分析方法2.1制備的CTL細(xì)胞IFN-g、IL-10、CD4、CD8、CD25、CD56、CD69的表達(dá)[7]
    1.851Cr釋放法檢測(cè)CTL對(duì)CEA陽性細(xì)胞株的殺傷效率［7］
2 結(jié)果
    2.1 r AAV/CEA轉(zhuǎn)染組成熟DC誘導(dǎo)CTL克隆形態(tài)
    2.2 r AAV/CEA病毒轉(zhuǎn)染DC效率(圖1)
    2.3 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)情況(表1)
    2.4 r AAV/CEA基因轉(zhuǎn)染組DC誘導(dǎo)CTL細(xì)胞IFN- g和IL-4的表達(dá)(圖2)
    2.5 r AAV/CEA轉(zhuǎn)染組DC誘導(dǎo)CTL表面標(biāo)志CD4、CD8、CD25、CD56、CD69表達(dá)變化(圖3)
    2.651Cr釋放法檢測(cè)所誘導(dǎo)CTL的殺傷活性:CTL細(xì)胞毒試驗(yàn)結(jié)果(表2)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]BA46基因轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞治療乳腺癌的研究[J]. 尤長宣,羅榮城,蘇瑾,張軍一,廖旺軍,鄭航,Yong Liu,Paul L Hermonat.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2005(07)
[2]腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)乳腺癌BA46基因轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 尤長宣,羅榮城,蘇瑾,張軍一,廖旺軍,鄭航,Paul L Hermonat.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2004(09)



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