惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的健康。腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移依賴于血管生成。通過抑制腫瘤相關(guān)的血管生成可以抑制腫瘤的生長。1997年，F(xiàn)olkman和O’Reilly發(fā)現(xiàn)了一種內(nèi)源性的血管及腫瘤生長抑制劑--內(nèi)皮抑素（endostatin），endostatin是膠原XVIII的C-端184個氨基酸片段，其中酸性氨基酸16個，堿性氨基酸29個，半胱氨酸4個，疏水氨基酸占42%， pI為9.3。它是天然而有效的血管生成抑制劑，是專一的內(nèi)皮細(xì)胞增殖抑制物，能抑制來源于不同組織的腫瘤形成和遷移而不引起抗藥性。本課題運用基因工程技術(shù)，將從人胎肝組織克隆的內(nèi)皮抑素（human endostatin, hES）基因進(jìn)行原核表達(dá)、純化，檢測重組hES的抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖及抗血管生成的生物學(xué)活性，并制備高效價的特異的抗hES多克隆抗體（pAb）。我們采用亞克隆技術(shù)從重組克隆載體pT-hES獲得hES基因，構(gòu)建融合表達(dá)載體pGEX-hES，重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌E .coli BL21，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)；用初步純化的hES包涵體蛋白免疫新西蘭大白兔，制備抗<WP=7>hES多克隆抗體（兔抗人），Western... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

GST融合蛋白載體圖譜

-2 Identification of the characteristic of anti-hES antibody 圖 3-2 Western blot 檢測 ES 在小鼠各組織中的表-親和素系統(tǒng) biotin-avidin system BAS 在 70 年到迅速發(fā)展的一種生物反應(yīng)放大鑒定系統(tǒng) 由于它和力 并與熒光素 抗體 酶等免疫標(biāo)記技術(shù)有機(jī)使各種示蹤免疫分析的特異性和靈敏度進(jìn)一步提了生物素-酶標(biāo)親和素復(fù)合物技術(shù) ABC 法[34]素和酶標(biāo)記物 如 HRP 親和素結(jié)合 形成可溶合物 Avidin-Biotin- peroxidase complex, ABC 時 ABC 中的未飽和的親和素結(jié)合部位可與抗體

of different concentration of recoostatin on ECV304 cells ( ±s. hES 對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生長的Borio-allantoic membrane assayof control groups(treated with ls of tested groups(treated with hE毛膜尿囊膜試驗(CAM)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人內(nèi)皮抑素cDNA克隆和初步表達(dá)[J]. 張革,曾昭淳,劉萬里.  重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2001(02)
[2]內(nèi)抑素基因?qū)π∈髣用}粥樣硬化斑塊發(fā)展的作用[J]. 朱建健,郭艷紅,高煒,朱國英,湯健,陳光慧.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2001(12)



本文編號：3359721