目的評價輪狀病毒（Rotaviruses,RVs）疫苗株Rotarix和RotaTeq VP8^*蛋白與組織血型抗原（histo-blood group antigens,HBGAs）基因融合的免疫效果。方法從GenBank獲取Rotarix和RotaTeq兩種疫苗VP8^*蛋白基因序列,根據(jù)大腸埃希菌常用密碼子進(jìn)行序列優(yōu)化后人工合成Rotarix和RotaTeqVP8^*蛋白基因并采用PCR擴(kuò)增合成的兩種基因,引物上、下游分別引入Nde I和Xho I限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)。將PCR產(chǎn)物及載體pET-30a用Nde I和Xho I雙酶切,經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳回收目的片段后在T4連接酶作用下連接,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至DH5α感受態(tài)細(xì)胞并進(jìn)行PCR鑒定,取陽性菌液提取質(zhì)粒,經(jīng)Nde I和Xho I雙酶切鑒定正確后測序。將合成的基因序列與表達(dá)載體pET-30a連接后導(dǎo)入大腸埃希菌BL21（DE3）,加入IPTG誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)Ni²⁺ beads親和層析純化得到VP8^*-His融合蛋白,進(jìn)行SD... 

【文章來源】：中國病原生物學(xué)雜志. 2019,14(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

圖１純化ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白鑒定Ｍ蛋白準(zhǔn)品１ＲｏｔａＴｅｑＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白２ＲｏｔａｒｉｘＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白

ｒ１ＲｏｔａＴｅｑＶＰ８＊－ＨｉｓＦｕｓｉｏｎＰｒｏｔｅｉｎ２ＲｏｔａｒｉｘＶＰ８＊－ＨｉｓＦｕｓｉｏｎＰｒｏｔｅｉｎＦｉｇ．１ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｕｒｉｆｉｅｄＶＰ８＊－Ｈｉｓｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ２ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白與寡糖的結(jié)合酶標(biāo)法檢測不同ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白與各型人工合成寡糖的結(jié)合性，結(jié)果見圖２。Ｒｏｔａｒｉｘ和ＲｏｔａＴｅｑ－ＶＰ８＊融合蛋白均能與Ｈ１型寡糖結(jié)合，與其他幾種寡糖結(jié)合較弱。圖２ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白與寡糖的結(jié)合Ｆｉｇ．２ＴｈｅｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｂｉｎｄｉｎｇａｓｓａｙｏｆＶＰ８＊－Ｈｉｓｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ３ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白與唾液的結(jié)合酶標(biāo)法檢測兩個ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白與不同表型唾液標(biāo)本的結(jié)合性，結(jié)果見圖３和圖４。ＲｏｔａＴｅｑ和ＲｏｔａｒｉｘＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白均與分泌型唾液結(jié)合，而不與非分泌型唾液。ＡＡ型唾液ＡＢＡＢ型唾液ＢＢ型唾液ＯＯ型唾液Ｏ－Ｏ－型唾液圖３ＲｏｔａＴｅｑＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白與唾液的結(jié)合ＡＴｙｐｅＡｓａｌｉｖａＡＢＴｙｐｅＡＢｓａｌｉｖａＢＴｙｐｅＢｓａｌｉｖａＯＴｙｐｅＯｓａｌｉｖａＯ－ＴｙｐｅＯ－ｓａｌｉｖａＦｉｇ．３ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｐａｔｔｅｒｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＲｏｔａＴｅｑＶＰ８＊－ＨｉｓｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｔｈｅｓａｌｉｖａＡＡ型唾液ＡＢＡＢ型唾液ＢＢ型唾液ＯＯ

蛋白與寡糖的結(jié)合Ｆｉｇ．２ＴｈｅｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｂｉｎｄｉｎｇａｓｓａｙｏｆＶＰ８＊－Ｈｉｓｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ３ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白與唾液的結(jié)合酶標(biāo)法檢測兩個ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白與不同表型唾液標(biāo)本的結(jié)合性，結(jié)果見圖３和圖４。ＲｏｔａＴｅｑ和ＲｏｔａｒｉｘＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白均與分泌型唾液結(jié)合，而不與非分泌型唾液。ＡＡ型唾液ＡＢＡＢ型唾液ＢＢ型唾液ＯＯ型唾液Ｏ－Ｏ－型唾液圖３ＲｏｔａＴｅｑＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白與唾液的結(jié)合ＡＴｙｐｅＡｓａｌｉｖａＡＢＴｙｐｅＡＢｓａｌｉｖａＢＴｙｐｅＢｓａｌｉｖａＯＴｙｐｅＯｓａｌｉｖａＯ－ＴｙｐｅＯ－ｓａｌｉｖａＦｉｇ．３ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｐａｔｔｅｒｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＲｏｔａＴｅｑＶＰ８＊－ＨｉｓｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｔｈｅｓａｌｉｖａＡＡ型唾液ＡＢＡＢ型唾液ＢＢ型唾液ＯＯ型唾液Ｏ－Ｏ－型唾液圖４ＲｏｔａｒｉｘＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白與唾液的結(jié)合ＡＴｙｐｅＡｓａｌｉｖａＡＢＴｙｐｅＡＢｓａｌｉｖａＢＴｙｐｅＢｓａｌｉｖａＯＴｙｐｅＯｓａｌｉｖａＯ－ＴｙｐｅＯ－ｓａｌｉｖａＦｉｇ．４ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｐａｔｔｅｒｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＲｏｔａｒｉｘＶＰ８＊－Ｈｉｓｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｔｈｅｓａｌｉｖａ·７４５·中國病原生物學(xué)雜志ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｇｅｎＢｉｏｌｏｇｙ２０１９年


本文編號：3356088