戊型肝炎作為一種經(jīng)糞-口途徑傳播的急性傳染病，主要流行于亞洲、非洲、中美洲等發(fā)展中國(guó)家和地區(qū)。其病毒基因組是單股線狀正鏈RNA，長(zhǎng)約7.5kb，由5′非編碼區(qū)、編碼區(qū)和3′非編碼區(qū)組成，編碼區(qū)包括三個(gè)開放讀碼框架（ORFs）。其中結(jié)構(gòu)基因ORF2位于基因組的3′端，長(zhǎng)1980bp，編碼病毒的結(jié)構(gòu)蛋白。本實(shí)驗(yàn)采用戊型肝炎病毒（HEV）新疆流行株（CH1.1）ORF2區(qū)3′端cDNA片段492bp，插入到融合蛋白表達(dá)載體pGEX-4T-3，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌TG-1進(jìn)行表達(dá)，以獲得的GST-HEV融合蛋白作為抗原，應(yīng)用于酶免疫檢測(cè)（EIA）中。一、HEV目的基因的擴(kuò)增 采用RT-nPCR法，擴(kuò)增HEV ORF2區(qū)的核苷酸序列，目標(biāo)長(zhǎng)度為492bp，稱為HEV ORF2 cDNA。二、目的基因與融合蛋白表達(dá)載體pGEX-4T-3重組體的構(gòu)建 BamHI/EcoRI雙酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物和pGEX-4T-3質(zhì)粒，T₄連接酶連接酶切產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞TG-1，堿裂解法提取質(zhì)粒DNA。經(jīng)酶切、PCR鑒定，1％瓊脂糖凝膠電泳，紫外檢測(cè)儀下均可見約500bp陽性條帶，從... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
一、 中文摘要
二、 英文摘要
三、 論文正文
    戊型肝炎病毒結(jié)構(gòu)區(qū)ORF2基因的克隆與表達(dá)
四、 綜述
    基因重組表達(dá)戊型肝炎病毒的研究進(jìn)展
五、 譯文
    戊型肝炎的研究現(xiàn)狀
六、 致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]戊型肝炎病毒結(jié)構(gòu)區(qū)基因在大腸桿菌中的表達(dá)及其在診斷中的應(yīng)用[J]. 畢勝利,江永珍,趙洪蘭,李景元,魯健,曹經(jīng)瑗,劉崇柏.  病毒學(xué)報(bào). 1996(02)
[2]戊肝病毒活性肽的選擇、合成與應(yīng)用[J]. 戚中田,潘衛(wèi),崔大敷,俞超,崔恒冉.  中國(guó)病毒學(xué). 1995(04)
[3]戊型肝炎病毒中國(guó)XT-179株全基因組cDNA克隆及其核苷酸和氨基酸序列分析[J]. 馬學(xué)眾,曹學(xué)義,內(nèi)田俟和,Thin Thin Aye,志方俊夫.  中國(guó)病毒學(xué). 1993(04)
[4]我國(guó)戊型肝炎病毒結(jié)構(gòu)區(qū)基因組的序列分析[J]. 莊輝,李凡,郭曉霞,馬學(xué)眾,艾婷婷,內(nèi)田俊和,志方俊夫.  中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志. 1993 (01)



本文編號(hào)：3126123