目的 建立一種改進的AdEasy系統(tǒng)應用于復制缺陷型腺病毒的構建，針對傳統(tǒng)的細菌內同源重組法制備腺病毒過程仍較復雜，成功率低和對實驗室條件要求高等缺點，通過先構建AdEasier-1細菌后進行細菌內同源重組來簡化實驗過程，縮短實驗周期，提高成功率，降低對實驗室條件的要求，以利于在更多實驗室應用。并利用這一系統(tǒng)構建KDR啟動子驅動下的同時含大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶（CD）基因和Ⅰ型單純皰疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因的融合基因重組腺病毒載體，應用于大腸癌的抗血管生成治療。利用KDR啟動子對腫瘤新生血管內皮細胞的靶向作用，驅動CD/5-FC和HSV-TK/GCV兩套自殺基因系統(tǒng)特異性殺傷腫瘤新生血管內皮細胞，為進一步開展腫瘤血管的靶向治療研究奠定基礎。 方法 1、改進的AdEasy系統(tǒng)的建立 應用氯化鈣法將腺病毒骨架質粒AdEasey-1轉化于BJ5183菌，所得陽性克隆即為AdEasier-1細菌，pAdtrack經(jīng)酶切線性化后，轉化用氯化鈣制備的感受態(tài)AdEasier-1細菌，獲得重組腺病毒質粒。最后將線性化的重組腺病毒質粒轉染293細胞包裝獲得重組腺病毒。通過... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

經(jīng)3次293細胞內的擴增，并經(jīng)cscl梯度離心后，病毒滴度為Zxlo，’pfil八nl

Plas而dPeDNA3一CDTK誠thPrilnerCD(刊CD(一):Lane6:PCRProduetofPlas而dPcDNA3一CDTKwithPnmerTK(+盯K(一)圖2一重組質粒pKDR-CDTK的PCR及酶切鑒定Fig.2一2IdentifiCationofn沈ombinantpKI〕R-CDTKbyPCR陰drestrictionenZymedigestionLalleKDR1:M扭火e(1加bPladder，TaK司Ra);LaneZ:PCRProduetsofgenescodiilgLalle3:pKDR一CDTKdegisted初thBglll干牙ndlll;L川e4:M擬火er田016一2，dingguo)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]血管內皮生長因子及其受體在人大腸癌組織中的分布、定量和意義[J]. 陳治,王曉莉,張莉,黃宗海,潘玉先,曹長安.  世界華人消化雜志. 2000(04)



本文編號：3115455