目的：構(gòu)建人巨細胞病毒（HCMV）AD169株及地方株基因組cDNA表達文庫，為進一步研究其基因組的結(jié)構(gòu)特點及功能創(chuàng)立基本條件。方法：從MOI=10人巨細胞病毒（HCMV）感染HF細胞96小時，提取mRNA OD260/OD280比值為2.1，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA片段，重組入λgtll EcoR酶切位點之間，包裝蛋白包裝，轉(zhuǎn)染宿主菌LE392和Y1090；經(jīng)IPTG誘導(dǎo)和x-gal顏色選擇測定。采用鼠多克隆抗血清進行免疫學(xué)篩選和地高辛標(biāo)記特異性寡核苷酸探針進行原位噬斑雜交篩選陽性克隆，經(jīng)PCR擴增鑒定。結(jié)果：構(gòu)建的cDNA表達文庫的庫容量分別為3.6×10⁶pfu/ml和3.3×10⁶pfu/ml，經(jīng)檢測HCMV AD169 cDNA文庫的重組效率為76%；免疫學(xué)篩選出陽性克隆為168；pp65核酸探針進行噬斑雜交篩選出34個陽性克�。籋CMV pp65全長PCR擴增出3個陽性克隆。結(jié)論：通過抗血清和核酸雜交篩選證實成功的構(gòu)建了HCMV AD169株感染96小時cDNA表達文庫，并從AD169文庫中篩選出3個pp65陽性克隆。本研究結(jié)果將為闡明... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
英文摘要
引言
材料方法
結(jié)果
討論
小結(jié)
參考文獻
附錄
致謝
綜述


【參考文獻】：
期刊論文
[1]人巨細胞病毒先天性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染小鼠模型的建立[J]. 王明麗,唐久來,胡聞,史百芬,胡勇,畢克菊,李京培.  動物學(xué)報. 2000(02)
[2]孕婦巨細胞病毒感染與嬰兒先天性感染和先天性缺損的關(guān)系[J]. 傅建林,宋干,王汝琪,戴云.  中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報. 1983(03)



本文編號：3021751