發(fā)布時(shí)間：2021-02-07 04:18

　　丙型肝炎病毒（HCV）是導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬化、肝細(xì)胞肝癌的重要病原體之一，全世界有1.7億人被HCV感染，約占全球人口的3％。目前，尚無有效的丙型肝炎預(yù)防疫苗及治療藥物，因此對HCV感染的早期診斷是有效控制丙型肝炎傳播的重要手段。 目前，HCV的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)主要有血清HCV RNA、抗-HCV抗體及HCV抗原檢測。PCR檢測HCV RNA是目前HCV診斷最靈敏、特異的方法，但其操作比較復(fù)雜，易造成污染，且價(jià)格昂貴，不適于大規(guī)模的篩查應(yīng)用。丙型肝炎患者血清中的抗原水平很低，常規(guī)的免疫學(xué)、病毒學(xué)方法難以獲得陽性結(jié)果，因此，血清HCV抗原檢測尚不能作為一種實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測手段。目前，臨床上應(yīng)用最多的方法仍是以檢測血清抗-HCV抗體為主。 抗-HCV抗體檢測方法主要包括酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）和重組免疫印跡法（RIBA），其中RIBA是ELISA的確證方法，其試劑較為昂貴，難以普及。抗-HCV ELISA具有敏感性高、特異性強(qiáng)、簡便快速，適于大規(guī)模檢測等特點(diǎn)，其敏感性和特異性主要是依賴于不同抗原或其表位的選擇，不同的抗原或同一抗原的不同表位對抗-HCV抗體的檢測結(jié)果有顯著差異... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 丙型肝炎病毒核心抗原基因片段重組表達(dá)載體的構(gòu)建
    材料和方法
        一、 材料
        二、 實(shí)驗(yàn)方法
            （一） 引物設(shè)計(jì)
            （二） PCR擴(kuò)增
            （三） 目的基因的克隆
                1 質(zhì)粒DNA的制備及酶切
                2 目的基因片段的純化、酶切
                3 質(zhì)粒大片段及目的基因片段的分離和回收
                4 目的基因片斷與載體的連接反應(yīng)
                5 感受態(tài)細(xì)胞的制備
                6 轉(zhuǎn)化
            （四） 重組克隆的篩選及鑒定
                1 初步鑒定
                2 酶切鑒定
            （五） C119基因序列測定及同源性分析
    結(jié)果
        一、 C119基因的擴(kuò)增
        二、 重組克隆的篩選及鑒定
        三、 序列的測定及同源性分析
    討論
    小結(jié)
第二部分 重組蛋白的表達(dá)、純化及抗原性研究
    材料和方法
        一、 材料
        二、 實(shí)驗(yàn)方法
            （一） C119工程菌的發(fā)酵
            （二） 表達(dá)產(chǎn)物的溶解性分析
            （三） 表達(dá)產(chǎn)物的純化
            （四） 純化后蛋白的含量測定
            （五） 表達(dá)產(chǎn)物及純化后蛋白的SDS-PAGE分析
            （六） 表達(dá)產(chǎn)物及純化后蛋白Western-blot分析
            （七） 純化后蛋白用于臨床血清的ELISA檢測
                （一） 敏感性和特異性
                （二） 重復(fù)性試驗(yàn)
    結(jié)果
        一、 重組質(zhì)粒的表達(dá)
            （一） 誘導(dǎo)時(shí)機(jī)的優(yōu)化
            （二） 誘導(dǎo)時(shí)間的優(yōu)化
            （三） 誘導(dǎo)劑濃度的優(yōu)化
        二、 表達(dá)蛋白的純化
        三、 純化后蛋白含量的測定
        四、 表達(dá)產(chǎn)物及純化后蛋白Western-blot分析
        五、 純化后的蛋白用于ELISA檢測
            （一） 敏感性和特異性
            （二） 重復(fù)性試驗(yàn)
    討論
    小結(jié)
總結(jié)
研究展望
參考文獻(xiàn)
致謝
綜述
附錄: 論文發(fā)表情況



本文編號：3021643