本文關(guān)鍵詞：人PERK和ATF4基因siRNA腺病毒的構(gòu)建及對(duì)軟骨細(xì)胞凋亡的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討靶向構(gòu)建的攜帶人蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase, PERK)基因和活化轉(zhuǎn)錄因子4 (activiting transcription factor 4, ATF4)基因的小干擾RNA (small interfering RNA, siRNA)重組腺病毒對(duì)軟骨細(xì)胞凋亡的影響。方法應(yīng)用AdEasyTM腺病毒載體系統(tǒng),構(gòu)建并包裝重組腺病毒siPERK和siATF4。感染細(xì)胞后,通過(guò)RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)軟骨細(xì)胞ATDC5中PERK和ATF4 mRNA和蛋白的表達(dá)。應(yīng)用衣霉素(Tunicamycin, TM)建立內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic reticulum stress, ERS)模型,觀察當(dāng)ATF4被沉默時(shí),ATDC5細(xì)胞的增殖和凋亡情況,以及感染重組腺病毒siPERK時(shí),SW1353細(xì)胞的增殖和凋亡情況；微團(tuán)培養(yǎng)ATDC5和C3H10T1/2細(xì)胞,應(yīng)用骨形態(tài)發(fā)生蛋白2 (Bone morphogenetic protein 2, BMP2)誘導(dǎo)細(xì)胞分化,分別在第1,3,5天時(shí)感染Ad-RFP、siPERK和siATF4重組腺病毒,采用FCM、TUNEL、免疫印跡和免疫組化等檢測(cè)軟骨細(xì)胞分化過(guò)程中的凋亡情況。結(jié)果成功構(gòu)建并獲得重組腺病毒siPERK和siATF4。重組腺病毒處理細(xì)胞48h后,ATDC5細(xì)胞中PERK和ATF4的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯下降(P0.05)。在ERS狀態(tài)下,siATF4感染后,與對(duì)照組相比較,ATDC5細(xì)胞的凋亡率明顯降低(P0.05),增殖明顯增加(P0.05)；siPERK重組腺病毒感染細(xì)胞后,SW1353細(xì)胞增殖增加(P0.05),凋亡率降低(P0.05)；在BMP2誘導(dǎo)細(xì)胞分化過(guò)程中,FCM結(jié)果顯示,siPERK和siATF4重組腺病毒聯(lián)合感染組細(xì)胞凋亡率逐漸升高,且高于對(duì)照組(P0.05)。免疫印跡和免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果與FCM結(jié)果一致。結(jié)論在ERS狀態(tài)時(shí),沉默ATF4可以促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖并抑制其凋亡；抑制PERK基因可以促進(jìn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)下軟骨肉瘤細(xì)胞的增殖,并抑制其凋亡；而在軟骨細(xì)胞分化過(guò)程中,同時(shí)沉默PERK和ATF4可促進(jìn)軟骨細(xì)胞的凋亡。
【關(guān)鍵詞】：PERK ATF4 BMP2 軟骨細(xì)胞 凋亡
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R3416
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 siPERK和siATF4重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定14-28
• 1 材料與方法14-24
• 2 結(jié)果24-27
• 3 討論27-28
• 第二部分 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)下siATF4重組腺病毒對(duì)ATDC5細(xì)胞凋亡的研究28-36
• 1 材料與方法28-30
• 2 結(jié)果30-35
• 3 討論35-36
• 第三部分 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時(shí)siPERK對(duì)軟骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響36-42
• 1 材料與方法36-37
• 2 結(jié)果37-41
• 3 討論41-42
• 第四部分 軟骨細(xì)胞分化過(guò)程中siPERK聯(lián)合siATF4誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)凋亡的研究42-51
• 1 材料與方法42-44
• 2 結(jié)果44-49
• 3 討論49-51
• 全文總結(jié)51-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 文獻(xiàn)綜述：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與骨相關(guān)疾病的研究進(jìn)展56-62
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 致謝62-63
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文63

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2 劉曉東,楊淑霞;胚胎發(fā)育的軟骨細(xì)胞凋亡[J];西南國(guó)防醫(yī)藥;2003年03期

3 雷鳴,郭風(fēng)勁,許濤,陳安民,宋登新;超低頻電磁場(chǎng)對(duì)硝普鈉誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡的影響[J];中國(guó)康復(fù);2005年03期

4 司全明,侯筱魁,唐敏;關(guān)節(jié)內(nèi)骨折后受損軟骨細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)矯形外科雜志;2002年07期

5 王世捷;郭雄;張銀剛;任峰玲;彭雙清;曹峻嶺;師鐘麗;張?jiān)鲨F;;丁烯酸內(nèi)酯誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年04期

6 邵世坤;裴福興;狄東華;趙建忠;;關(guān)節(jié)軟骨撞擊傷后軟骨細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)矯形外科雜志;2007年10期

7 雒煥生;李楠;王和鳴;;中藥對(duì)軟骨細(xì)胞凋亡影響的研究進(jìn)展[J];中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志;2010年03期

8 袁經(jīng)陽(yáng);;膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎病變與細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因表達(dá)關(guān)系[J];中醫(yī)臨床研究;2011年02期

9 邢濤;董林;魏國(guó)俊;雷寧波;王志勇;徐玉德;;骨刺消巴布劑對(duì)兔膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡的影響[J];中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志;2012年11期

10 宋長(zhǎng)志;鄭閩前;周曉曄;紀(jì)標(biāo);楊升全;董啟榕;;創(chuàng)傷后早期關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射透明質(zhì)酸對(duì)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的影響[J];實(shí)用骨科雜志;2013年01期

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1 李建華;黃建榮;盧佳怡;樊雪萍;許繼德;;胰島素樣生長(zhǎng)因子-I對(duì)白介素-1誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡的抑制作用[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第21屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

2 周小莉;李榮亨;;軟骨細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[A];全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合強(qiáng)直性脊柱炎專題研討會(huì)論文匯編[C];2007年

3 沈霖;楊艷萍;;維甲酸誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡動(dòng)態(tài)觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會(huì)成立十周年論文匯編[C];2011年

4 林木南;李西海;林葉青;劉獻(xiàn)祥;曾金雄;劉建華;郭健紅;梁永剛;涂向東;劉慶紅;;動(dòng)態(tài)溫?zé)崾杳懿▽?duì)軟骨細(xì)胞凋亡調(diào)控基因表達(dá)的影響[A];2012·中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會(huì)第三次會(huì)議論文集[C];2012年

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6 沈霖;沈耀;楊述華;;丹參注射液對(duì)維甲酸誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡的影響[A];2012·中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會(huì)第三次會(huì)議論文集[C];2012年

7 劉建;樊冰;周海蓉;姜萍;周翠英;;四妙丸干預(yù)實(shí)驗(yàn)性兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡與增殖的實(shí)驗(yàn)研究[A];第十一屆全國(guó)中醫(yī)風(fēng)濕病學(xué)術(shù)研討會(huì)專輯[C];2006年

8 趙慶華;田紀(jì)偉;賈連順;;重組腺病毒介導(dǎo)SOX-9基因?qū)︻i椎關(guān)節(jié)突軟骨細(xì)胞凋亡的影響[A];泛長(zhǎng)江流域骨科新進(jìn)展暨第九屆全國(guó)骨科護(hù)理研討會(huì)論文匯編[C];2007年

9 周正新;;生脈片對(duì)IL-1介導(dǎo)體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞凋亡的影響[A];中醫(yī)藥理論與應(yīng)用研究——安徽中醫(yī)藥繼承與創(chuàng)新博士科技論壇論文集[C];2008年

10 潘浩;胡慶豐;章煜銘;李雄峰;邊紅光;;補(bǔ)腎壯筋湯對(duì)兔早期實(shí)驗(yàn)性骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡及PCNA表達(dá)的影響[A];全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)骨傷科專業(yè)委員會(huì)第十二次學(xué)術(shù)年會(huì)浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)骨傷科專業(yè)委員會(huì)第十次學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2004年

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1 袁鳳來(lái);質(zhì)子感知受體OGR1介導(dǎo)胞內(nèi)Ca~(2+)水平調(diào)控椎間盤終板軟骨細(xì)胞凋亡及機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 夏天;胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ抑制體外培養(yǎng)的兔軟骨細(xì)胞凋亡及對(duì)細(xì)胞內(nèi)游離鈣影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2006年

3 劉軍;雌激素與骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制關(guān)系的研究[D];吉林大學(xué);2009年

4 葉春婷;Caspase 3 siRNA抑制軟骨細(xì)胞凋亡及治療骨關(guān)節(jié)炎研究[D];暨南大學(xué);2009年

5 金連峰;單味中藥骨碎補(bǔ)對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2009年

6 胡建華;骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1999年

7 張梅;馬錢子對(duì)骨關(guān)節(jié)炎中軟骨細(xì)胞凋亡與增殖的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2003年

8 張洪;細(xì)胞凋亡與骨關(guān)節(jié)炎[D];中南大學(xué);2008年

9 蘆北極;L-單甲基—精氨酸對(duì)減少關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2012年

10 范李;辛伐他汀防治骨關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2010年

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1 廖邦強(qiáng);GGCX對(duì)兔骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡的影響及其對(duì)IL-1β、TNF表達(dá)的影響[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2015年

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5 王傳家;一氧化氮誘導(dǎo)兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];汕頭大學(xué);2001年

6 榮超;酸敏感離子通道在酸誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡中的作用及其線粒體途徑機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

7 王毅鵬;5-氮雜脫氧胞苷誘導(dǎo)兔軟骨細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)性研究[D];中南大學(xué);2008年

8 吳東迎;人參皂甙Rg1拮抗大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

9 王世東;基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1對(duì)兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

10 韋桂勇;電針對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎家兔模型軟骨細(xì)胞凋亡的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：人PERK和ATF4基因siRNA腺病毒的構(gòu)建及對(duì)軟骨細(xì)胞凋亡的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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