本文關鍵詞：紅斑丹毒絲菌的致病性研究及其表面蛋白的MALDI-TOF質譜分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：丹毒病是一種廣泛分布于全世界的古老疾病,紅斑丹毒絲菌是該疾病的主要病原體,其特殊的細胞壁結構賦予了其獨特的生存方式,這種適應性極強的細菌對全世界的養(yǎng)殖業(yè)和公共衛(wèi)生系統(tǒng)都是一大威脅。在本研究中,小鼠致病性試驗、補體抗性試驗和抗吞噬試驗被用來比較紅斑丹毒絲菌的致病性,分別以半致死劑量(LD50),血清敏感性和吞噬指數(shù)作為衡量標準。結果顯示:S型紅斑丹毒絲菌在小鼠毒力模型中表現(xiàn)出了很強的致病性,C43065株和C43311株的腹腔注射半致死劑量(LD50)分別為81.59 CFU和191.04CFU,而注射了R型紅斑丹毒絲菌的小鼠全部正常。在抗吞噬指數(shù)這一項上,S型紅斑丹毒絲菌也顯著強于R型菌株。對血清中的補體成分的抵抗力的表現(xiàn)上,S型紅斑丹毒絲菌的繁殖速率基本沒有受到影響,明顯強于繁殖速率降低了一倍的R型紅斑丹毒絲菌。以groEL基因作為分子標記所進行的測序及系統(tǒng)發(fā)育分析結果表明,C43065株、C43001株C43309株和C43311株紅斑丹毒絲菌的groEL基因長度全部為1614bp,能編碼一個長537個氨基酸的熱休克蛋白HPS60,這段基因序列與已公布的紅斑丹毒絲菌標準株ATCC19414和扁導體丹毒絲菌標準株ATCC43339的groEL基因有著很高的相似性,16S rRNA編碼基因的測序結果表明,長度為1351 bp的該段序列與上述兩種標準株的同源性均為99%。通過MAGA軟件的最大簡約算法(maximum parsimony method)的進行的系統(tǒng)發(fā)育分析結果發(fā)現(xiàn),四株細菌均屬于在紅斑丹毒絲菌屬,已兩個標準株作為對照參考的分析結果表明,在屬內的種間鑒別上,groEL基因序列有著更高的分辨率。根據(jù)伯杰氏系統(tǒng)細菌學手冊Jones的研究,紅斑丹毒絲菌可按菌體形態(tài)、菌落大小、表面特征、透明度和顏色、邊沿特征六項表型特征差異被分成S型和R型,分析結果表明具有強致病性的C43065株和C43001株屬于S型,無致病性的C43309株和C43311株屬于R型。為了研究導致紅斑丹毒絲菌不同菌株致病性差異的原因,對C43065株、C43001株、C43309株和C43311株紅斑丹毒絲的表面蛋白進行了分離提取,經(jīng)蛋白電泳分離后,用基質輔助激光解吸電離飛行時間(MALDI-TOF)質譜儀對電泳條帶中的蛋白進行了肽質量指紋圖譜的鑒定分析。從鑒定比對結果中發(fā)現(xiàn)了10種與已報到的毒力因子相同或相似的蛋白,但并未發(fā)現(xiàn)各菌株的表面蛋白之間的種類差異。酶聯(lián)接免疫吸附實驗(ELISA)的特異性和敏感性能定量的反映針對特定抗原所產(chǎn)生的抗體水平。通過間接ELISA法檢測發(fā)現(xiàn),S型紅斑丹毒絲菌的全菌體蛋白疫苗相比于R型紅斑丹毒絲菌全菌體蛋白能刺激實驗小鼠產(chǎn)生更高的抗體水平。與該結果想呼應的是,免疫保護實驗的結果表明,S型紅斑丹毒絲菌的全蛋白疫苗能對小鼠產(chǎn)生完全免疫保護,而C43309株和C43311株的全蛋白的保護率只能分別達到60%和70%。兩個結果都驗證了R型和S型紅斑丹毒絲菌的抗原性是存在差異的.
【關鍵詞】：紅斑丹毒絲菌 致病性差異 表面蛋白 抗原性 基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜分析
【學位授予單位】：吉首大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R378
【目錄】：

• 摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 第1章 緒論13-19
• 1.1 紅斑丹毒絲菌的感染與傳播13-14
• 1.2 紅斑丹毒絲菌感染的防治14-15
• 1.3 致病因子的研究15-17
• 1.3.1 透明質酸酶15
• 1.3.2 唾液酸苷酶15-16
• 1.3.3 粘附因子16
• 1.3.4 莢膜16-17
• 1.3.5 其它表面蛋白17
• 1.4 研究內容及意義17-19
• 第2章 紅斑丹毒絲菌不同菌株的致病性差異19-26
• 2.1 材料19-21
• 2.1.1 主要試劑19-20
• 2.1.2 主要儀器設備20-21
• 2.1.3 菌株21
• 2.1.4 實驗材料21
• 2.2 方法21-22
• 2.2.1 小鼠毒力試驗21
• 2.2.2 吞噬試驗21-22
• 2.2.3 補體抗性試驗22
• 2.3 結果與分析22-25
• 2.3.1 小鼠毒力實驗22-23
• 2.3.2 抗吞噬能力23-24
• 2.3.3 補體抗性24-25
• 2.4 討論25-26
• 第3章 分子鑒定和表型分析26-33
• 3.1 材料26-27
• 3.1.1 主要試劑26-27
• 3.1.2 主要儀器設備27
• 3.1.3 引物27
• 3.2 研究方法27-29
• 3.2.1 基因組DNA的提取27-28
• 3.2.2 16S r RNA基因的PCR擴增28
• 3.2.3 gro EL基因的PCR擴增28
• 3.2.4 系統(tǒng)發(fā)育樹的構建28
• 3.2.5 生長條件偏好28
• 3.2.6 表型特征28-29
• 3.3 結果與分析29-32
• 3.3.1 16S r RNA基因和gro EL基因的PCR擴增29
• 3.3.2 16S r RNA基因序列的系統(tǒng)發(fā)生學分析29-30
• 3.3.3 表型特征30-31
• 3.3.4 溫度偏好31-32
• 3.4 討論32-33
• 第4章 表面蛋白的提取及質譜分析33-39
• 4.1 材料33-35
• 4.1.1 主要試劑33-34
• 4.1.2 主要儀器34-35
• 4.2 研究方法35-36
• 4.2.1 表面蛋白的制備和分離35-36
• 4.2.2 表面蛋白鑒定分析36
• 4.3 結果與分析36-38
• 4.3.1 表面蛋白的制備和分離36
• 4.3.2 表面蛋白的鑒定分析36-38
• 4.4 討論38-39
• 第5章 交叉免疫保護及抗體的定量分析39-47
• 5.1 材料39-41
• 5.1.1 主要試劑39-41
• 5.1.2 主要儀器41
• 5.2 研究方法41-43
• 5.2.1 全菌體蛋白及Spa A蛋白的制備41-42
• 5.2.2 交叉免疫保護率的測定42-43
• 5.2.3 間接ELISA檢測抗體水平43
• 5.3 結果與分析43-45
• 5.3.1 全菌體蛋白及Spa A蛋白的制備43
• 5.3.2 交叉免疫保護率的測定43-44
• 5.3.3 抗體定量分析44-45
• 5.4 討論45-47
• 結束語47-48
• 致謝48-49
• 參考文獻49-55
• 作者在學期間取得的學術成果55

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本文編號：296810