本文關(guān)鍵詞：家蠶高血蛋白疾病模型的建立及其對(duì)絲腺退化發(fā)育的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：循環(huán)血液中的蛋白質(zhì)(氨基酸)水平異常是常見的代謝疾病,包括高蛋白血癥和低蛋白血癥。其中因?yàn)榘被岽x障礙引起的遺傳性氨基酸水平升高疾病已發(fā)現(xiàn)超過100種,然而還缺乏純粹意義的高蛋白血癥疾病相關(guān)病理和治療的報(bào)道。其主要原因是目前還無有效的高蛋白血癥動(dòng)物模型,也缺乏高蛋白血癥動(dòng)物模型建模方法的報(bào)道。為此,本文對(duì)無脊椎模式動(dòng)物家蠶開展了相關(guān)研究。絲腺是家蠶最具特色的器官,在家蠶幼蟲化蛹變態(tài)過程中發(fā)生典型的程序性死亡。對(duì)絲腺退化發(fā)育的研究一直受到廣泛地重視。本文在基礎(chǔ)形態(tài)和指標(biāo)測(cè)定的基礎(chǔ)上,應(yīng)用BCA方法測(cè)定家蠶血淋巴中的總蛋白,高效液相色譜法測(cè)定21種氨基酸相對(duì)含量。進(jìn)一步應(yīng)用PT-PCR、q RT-PCR方法調(diào)查了凋亡自噬基因在高血蛋白模型家蠶絲腺中的表達(dá)差異,免疫熒光檢測(cè)凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)情況。從細(xì)胞程序性死亡機(jī)制視角初步研究了高血蛋白對(duì)于絲腺退化異常的影響。主要結(jié)果如下:1家蠶高血蛋白疾病模型的建立本文使用的家蠶高血蛋白疾病模型的建模方法與原理是,在家蠶幼蟲成熟并停止進(jìn)食后,破壞或堵塞其頭部前段的吐絲孔,阻止絲腺中儲(chǔ)存蛋白質(zhì)外分泌。破壞或堵塞成熟幼蟲吐絲孔的方法有高溫或低溫激光、高溫燙傷、以及低熔點(diǎn)石蠟或無毒膠水封涂等,本文報(bào)道了低熔點(diǎn)石蠟封涂方法的建模結(jié)果。BCA方法測(cè)定該高血蛋白模型,9d 11d化蛹期間循環(huán)血總蛋白水平高于對(duì)照150-600%。高效液相色譜法測(cè)定的蛹期9d 11d期間循環(huán)血中總氨基酸水平高于對(duì)照130-200%,其中Ser,Gln,Thr,Arg,Val,Trp,Phe和Lys等8種氨基酸含量升高顯著,組氨酸(His)含量顯著降低。丙氨酸、絲氨酸和酪氨酸等幾種絲蛋白質(zhì)高含量的氨基酸疾病模型中合理地高于對(duì)照,而絲蛋白中含量33%的甘氨酸,在疾病模型家蠶的循環(huán)血與對(duì)照中沒有顯著差異。2家蠶高血蛋白疾病模型的絲腺組織退化以絲腺組織為靶組織研究的結(jié)果顯示,家蠶高血蛋白疾病模型的絲腺退化過程相對(duì)于對(duì)照組延長了約120h。HE染色觀察程序性細(xì)胞希望的典型特點(diǎn)。細(xì)胞自噬和凋亡信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果顯示,高血蛋白疾病模型家蠶的絲腺細(xì)胞中自噬信號(hào)基因Atg6和Atg8在家蠶化蛹期間表達(dá)上升顯著慢于對(duì)照組家蠶。而高血蛋白疾病模型家蠶中凋亡相關(guān)信號(hào)基因Dronc在化蛹期間的表達(dá)情況與對(duì)照組沒有顯著差異。免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,對(duì)照家蠶和高血蛋白疾病模型家蠶中啟動(dòng)細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵蛋白Caspase-3在絲腺整個(gè)退化過程中都表達(dá)。表明高血蛋白疾病模型家蠶絲腺退化延緩可能主要與自噬作用啟動(dòng)延遲有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：家蠶 高血蛋白 氨基酸 疾病模型 絲腺 程序性細(xì)胞死亡
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R589.3;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 序言10-21
• 1 血液蛋白質(zhì)（氨基酸）代謝疾病及其疾病模型10-12
• 2 家蠶疾病動(dòng)物模型12-13
• 3 家蠶絲腺的生物學(xué)特點(diǎn)及退化發(fā)育研究現(xiàn)狀13-18
• 4 本文研究內(nèi)容18-20
• 5 研究技術(shù)路線20-21
• 第二章 高血蛋白家蠶疾病模型的建立21-43
• 1 引言21-22
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法22-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物22
• 2.2 常用材料與試劑22-25
• 2.3 建模動(dòng)物處理25-26
• 2.4 家蠶繭層率統(tǒng)計(jì)26-27
• 2.5 家蠶變態(tài)期死亡率和化蛹狀態(tài)統(tǒng)計(jì)27
• 2.6 家蠶血淋巴中總蛋白含量檢測(cè)27
• 2.7 家蠶血淋巴中氨基酸含量檢測(cè)27-29
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析29-43
• 3.1 構(gòu)建高蛋白血癥家蠶疾病模型的幼蟲處理方法29
• 3.2 高蛋白血癥家蠶疾病模型的蠶品種選擇29-30
• 3.3 家蠶吐絲時(shí)間與吐絲量的關(guān)系30-31
• 3.4 阻止吐絲時(shí)間與家蠶死亡率的關(guān)系31-32
• 3.5 阻止吐絲時(shí)間對(duì)家蠶化蛹變態(tài)的影響32-34
• 3.6 高血蛋白模型家蠶血淋巴中總蛋白含量34-36
• 3.7 高血蛋白模型家蠶血淋巴中氨基酸含量36-43
• 第三章 高血蛋白家蠶的絲腺退化發(fā)育模式43-55
• 1 引言43-44
• 2 材料與方法44-47
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物44
• 2.2 絲腺的解剖及HE染色切片制作與觀察44
• 2.3 家蠶細(xì)胞程序性死亡基因Dronc，Atg6，Atg8 表達(dá)情況檢測(cè)44-46
• 2.4 家蠶絲腺中Caspase-3 蛋白的免疫熒光檢測(cè)46-47
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析47-55
• 3.1 家蠶高血蛋白疾病模型絲腺器官形態(tài)變化47-48
• 3.2 家蠶高血蛋白疾病模型絲腺組織切片觀察48-50
• 3.3 家蠶高血蛋白模型絲腺中細(xì)胞程序性死亡信號(hào)基因表達(dá)水平變化50-53
• 3.4 家蠶高血蛋白模型絲腺中Caspase-3 蛋白表達(dá)情況53-55
• 第四章 結(jié)論與討論55-58
• 1 高血蛋白家蠶疾病模型的構(gòu)建55-56
• 2 高血蛋白家蠶疾病模型的游離氨基酸特點(diǎn)56
• 3 高血蛋白家蠶疾病模型隨絲腺退化發(fā)育的影響56-57
• 4 論文創(chuàng)新點(diǎn)57
• 5 后續(xù)研究展望與建議57-58
• 參考文獻(xiàn)58-67
• 發(fā)表論文與申請(qǐng)專利67-68
• 致謝68-69

【參考文獻(xiàn)】

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8 吳，

本文編號(hào)：295657