發(fā)布時間：2020-10-20 10:57

　　 本文分別克隆并表達了人白細胞介素-18（human interleukin-18）和其突變體hIL-18-Ile48Met。從人外周血單核細胞（PBMC）經RT-PCR擴增得前體hIL-18，以此為模板PCR再擴增得到成熟hIL-18，構建pKKH-hIL-18重組體，轉化到大腸桿菌DH5α，經異丙基-β-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導表達，hIL-18的表達量占細菌總蛋白的20%。以重疊延伸法實現點突變，由異亮氨酸突變?yōu)榈鞍彼幔@得突變體hIL-18-Ile48Met，克隆到表達載體pBV220，轉化到大腸桿菌DH5α,溫控誘導表達。SDS-PAGE出現了約18KD左右的蛋白條帶，表達量占細菌總蛋白的25%。
【學位單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2002
【中圖分類】：Q78
【部分圖文】：

圖 6 Overlap PCR 示意圖 P1P5擴增上游片段 從 Pre-hIL-18 的 5′端開始到約 150 P2P6擴增下游片段 約 450bp 引物 P1P5擴增的 3′端增的 5′端為反向互補序列 見圖71 2 3圖 7. PCR 分別擴增上,下游片段1.下游片段 DNA (P2+P6)150bp450bp

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【參考文獻】

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本文編號：2848593