本文分別克隆并表達(dá)了人白細(xì)胞介素-18（human interleukin-18）和其突變體hIL-18-Ile48Met。從人外周血單核細(xì)胞（PBMC）經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增得前體hIL-18，以此為模板PCR再擴(kuò)增得到成熟hIL-18，構(gòu)建pKKH-hIL-18重組體，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α，經(jīng)異丙基-β-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá)，hIL-18的表達(dá)量占細(xì)菌總蛋白的20%。以重疊延伸法實現(xiàn)點突變，由異亮氨酸突變?yōu)榈鞍彼�，獲得突變體hIL-18-Ile48Met，克隆到表達(dá)載體pBV220，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α,溫控誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE出現(xiàn)了約18KD左右的蛋白條帶，表達(dá)量占細(xì)菌總蛋白的25%。
【學(xué)位單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：Q78
【部分圖文】：

圖 6 Overlap PCR 示意圖 P1P5擴(kuò)增上游片段 從 Pre-hIL-18 的 5′端開始到約 150 P2P6擴(kuò)增下游片段 約 450bp 引物 P1P5擴(kuò)增的 3′端增的 5′端為反向互補(bǔ)序列 見圖71 2 3圖 7. PCR 分別擴(kuò)增上,下游片段1.下游片段 DNA (P2+P6)150bp450bp

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第1電泳道可見兩
【參考文獻(xiàn)】

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1 孫文長;白細(xì)胞介素18研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊;2000年02期

2 蔣定文,李楚芳;IL-18信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);2000年05期

3 扈玉婷;白介素18結(jié)合蛋白研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);2001年02期

4 文維群,胡章勇,章廉;IL-18與疾病相關(guān)性的實驗研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;2001年01期

5 蔣定文,李楚芳;IL-18與IL-l相似的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2000年03期

6 陳吉泉,羅文侗,曹雪濤;IL-18及其抗腫瘤作用[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2000年04期

7 高立芬,劉君炎;IL-18與免疫相關(guān)性疾病[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2001年03期

8 蔣定文,李楚芳,郭明秋;白細(xì)胞介素18及其生物活性[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);1999年03期

9 文維群,章廉,胡章勇,張明霞,肖紅,錢毅;慢性乙型肝炎患者外周血單個核細(xì)胞中IL-18表達(dá)水平[J];免疫學(xué)雜志;2001年02期

10 劉華鋒,陳孝文,許勇芝,江黎明,吳平,劉海燕;原發(fā)性腎小球腎炎患者外周血IL-18 mRNA表達(dá)的研究[J];免疫學(xué)雜志;2001年05期

本文編號：2848593