發(fā)布時(shí)間：2020-08-26 14:48

【摘要】：狂犬病是一種通過動(dòng)物傳染的自然疫源性傳染病,其致死率為100%,接種狂犬病疫苗是控制狂犬病流行的唯一有效手段。Vero細(xì)胞是WHO推薦使用的人用疫苗生產(chǎn)基質(zhì)。目前國(guó)內(nèi)Vero細(xì)胞制備狂犬病疫苗均采用轉(zhuǎn)瓶生產(chǎn)工藝,由于受到轉(zhuǎn)瓶表面積和培養(yǎng)條件的限制,生產(chǎn)細(xì)胞密度低,勞動(dòng)強(qiáng)度大,操作過程易污染,疫苗質(zhì)量難以得到保證。自從60年代微載體生物反應(yīng)器培養(yǎng)技術(shù)建立以來,國(guó)外許多國(guó)家對(duì)其在疫苗生產(chǎn)中的應(yīng)用進(jìn)行了廣泛研究,國(guó)內(nèi)亦有多家研究機(jī)構(gòu)對(duì)貼壁依賴性細(xì)胞用生物反應(yīng)器分批式培養(yǎng)(batch)、流加式培養(yǎng)(Fed-batch culture)、半連續(xù)式培養(yǎng)(semi-continuous feeding culture)和灌注式培養(yǎng)(Perfusion culture)等方法培養(yǎng)進(jìn)行了多項(xiàng)研究,但很少將灌注培養(yǎng)方法全面用于疫苗生產(chǎn)。灌注培養(yǎng)是一方面新鮮培養(yǎng)基不斷加入反應(yīng)器,另一方面又將反應(yīng)器液體不斷取出,但細(xì)胞始終留在反應(yīng)器內(nèi)、處于不斷的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)下。通過調(diào)節(jié)灌注速度,補(bǔ)充細(xì)胞足夠的營(yíng)養(yǎng),去除有毒的代謝產(chǎn)物,可以使培養(yǎng)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定,培養(yǎng)過程始終保持在穩(wěn)定的、代謝廢物低于抑制水平的狀態(tài)。不僅大大提高了細(xì)胞生長(zhǎng)密度而且有助于產(chǎn)物的純化。我們對(duì)攪拌式生物反應(yīng)器灌注培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用于狂犬病疫苗生產(chǎn)作了進(jìn)一步研究,取得了很好的效果。 將預(yù)先用含牛血清的培養(yǎng)液浸泡24小時(shí)的微載體與僅經(jīng)過常規(guī)水化處理的微載體的細(xì)胞貼壁情況進(jìn)行比較,結(jié)果顯示浸泡可增加微載體對(duì)細(xì)胞的吸附能力,但對(duì)細(xì)胞貼壁的整體結(jié)果影響不大。經(jīng)培養(yǎng)液浸泡的微載體在120分鐘內(nèi)細(xì)胞貼壁率明顯高于后者,隨著時(shí)間延長(zhǎng),4小時(shí)后二者細(xì)胞貼壁率基本一致。而生物反應(yīng)器攪拌速度則對(duì)細(xì)胞貼附影響較大,攪拌速度設(shè)為50rpm左右,細(xì)胞貼壁率較高,4小時(shí)內(nèi)達(dá)80%以上;攪拌速度設(shè)為150rpm時(shí),細(xì)胞幾乎難以貼附微載體。 在反應(yīng)器培養(yǎng)試驗(yàn)中,分別用1×10~4/mL、1×10~5/mL和1×10~6/mL的細(xì)胞濃度接種反應(yīng)器,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在接種6小時(shí)后,90%細(xì)胞貼附上微載體;1×10~5mL接種濃度的第7天細(xì)胞密度達(dá)6-7×10~6/mL,細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定,維持時(shí)間長(zhǎng):而接種濃度為1×10~4/mL的12天細(xì)胞密度才能達(dá)到高峰:接種1×10~6/mL濃度的3天細(xì)胞密度即達(dá)高峰,但細(xì)胞老化快,有明顯較多細(xì)胞脫落的現(xiàn)象。 用1×10~5/mL細(xì)胞密度接種反應(yīng)器,于第7天細(xì)胞密度達(dá)6×10~6/mL左右時(shí)
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2805312