【摘要】：國外在八十多年前已開始研究免疫抑制劑，但因?yàn)樘禺愋圆�，有明顯副作用， 所以臨床效果不甚理想。李松教授根據(jù)CD4的立體構(gòu)型，運(yùn)用計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì) 方法，獲得了一些小分子非肽類免疫抑制劑，可以特異性阻斷CD4與MHC-Ⅱ 類分子β2的結(jié)合，但其體內(nèi)外生物學(xué)效應(yīng)還有待進(jìn)一步研究。 本研究先從李松教授提供的51種小分子有機(jī)化合物中，初步篩選出3種具 有特異性免疫抑制作用的小分子有機(jī)化合物，繼而分別在細(xì)胞水平、分子水平和 基因水平上探討它們的作用機(jī)理，為臨床上防治移植排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病 提供有效手段。 一．有免疫抑制作用的化合物的確定 應(yīng)用MTT法和3H-TdR摻入法，分別通過細(xì)胞系和人外周血，觀察這51種 化合物對(duì)混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的影響，初步評(píng)價(jià)它們是否具有免疫抑制作用。結(jié)果 70％的化合物具有免疫抑制作用，從中挑選3種具有明顯免疫抑制作用的化合物 D2、 J2和N2，對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行進(jìn)一步研究。 二．小分子免疫抑制劑的作用機(jī)理研究 1． 對(duì)細(xì)胞黏附作用的影響 利用肖鶴博士建立的HEK293／CD4細(xì)胞(表達(dá)CD4膜蛋白，并含有綠色熒 光蛋白)和本室現(xiàn)有的高表達(dá)MHC-Ⅱ類分子的細(xì)胞--Daudi細(xì)胞(用紅色熒 光染料染色)，使這兩種細(xì)胞相互作用，在體外模擬CD4與MHC-Ⅱ類分子的相 互作用，結(jié)果3種小分子化合物可以明顯抑制兩種細(xì)胞間的黏附。 2． 對(duì)細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響 CD4+T細(xì)胞受到刺激后活化，產(chǎn)生IL-2和IFN-γ等細(xì)胞因子，鑒于此， 用PMA和ionomycin刺激人PBMC活化，使其產(chǎn)生IL-2和IFN-γ，經(jīng)流式細(xì) 碩士論文 中文摘要 胞儀分析表明，3種小分子化合物普遍抑制了幾一2的產(chǎn)生，而對(duì)正N一Y的產(chǎn)生 影響不大。 3.對(duì)NF滬汀核因子表達(dá)的影響 T細(xì)胞激活后，IL一2轉(zhuǎn)錄升高，而幾一2增強(qiáng)子含有多個(gè)N下一AT結(jié)合位點(diǎn)， 提示NF一AT的表達(dá)與IL一2的表達(dá)呈正相關(guān)。為了進(jìn)一步證明T細(xì)胞激活，將人 PBMC用PMA和ionomyCin刺激的同時(shí)加入3種小分子化合物，將提取到的核 蛋白與合成的NF一AT探針結(jié)合，進(jìn)行凝膠阻滯電泳分析，檢測小分子化合物對(duì) NF一AT核因子的影響，結(jié)果它們對(duì)NF一AT核因子的表達(dá)有不同程度的抑制。 本文的研究初步表明，基于CD4立體構(gòu)型設(shè)計(jì)的小分子免疫抑制劑具有一 定的免疫抑制作用，有可能為臨床上防治移植排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病提供新 型治療手段。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R392
【圖文】：

CD4與MHC·n類分子相互作用示意圖

CD4表面袋子結(jié)構(gòu)與有機(jī)化合物結(jié)合示意圖

與MHC一11類分子的直接相互作用早已有研究，主要是通過觀(rosetteformation)[34一，7〕。玫瑰花結(jié)，顧名思義，即呈玫瑰花附分子的貼壁細(xì)胞周圍，結(jié)合有5個(gè)以上表達(dá)另一種勃附分子為一個(gè)玫瑰花結(jié)。本部分研究通過將CD4基因(已克隆到含EGFP入1表達(dá)載體)轉(zhuǎn)染入HEK293細(xì)胞(一種貼壁細(xì)胞)，再與異硫氰酸羅丹明)紅色熒光染料染色的表達(dá)MHC一n類分子的D37’C，lh，在鏡下觀察玫瑰花結(jié)的形成，若加入藥物后玫瑰花說明藥物能夠抑制兩種分子之間的砧附作用。同時(shí)加入陽性藥物對(duì)照產(chǎn)以此證明細(xì)胞勃附模型的可行性。此實(shí)驗(yàn)中，小分子化細(xì)胞豁附模型中的終濃度是100“mo比。以下各圖，發(fā)綠色細(xì)胞，發(fā)紅色熒光者是Daudi細(xì)胞。通過統(tǒng)計(jì)5個(gè)視野下形成計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞豁附的抑制率。

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2805506