【摘要】： 肺炎鏈球菌（streptococcus pneumoniae，S.pn）侵襲 宿主細(xì)胞是導(dǎo)致機(jī)體發(fā)病的重要環(huán)節(jié)，但啟動(dòng)侵襲的機(jī) 制尚不十分清楚。本文通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，研究S.pn是否可 通過(guò)肺Ⅱ型上皮細(xì)胞（A_(549)）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑觸發(fā)微絲肌 動(dòng)蛋白（filamentous actin，F(xiàn)-actin）細(xì)胞骨架重排，進(jìn) 而導(dǎo)致S.pn對(duì)A_(549)細(xì)胞的侵襲。方法：采用F-actin特 異性FITC-phalloidin熒光染料，觀察S.pn作用A_(549)細(xì) 胞前后的F-actin細(xì)胞骨架重排情況，依照重排百分率 得分標(biāo)準(zhǔn)以（％）表示；用F-actin細(xì)胞骨架重排抑制劑 細(xì)胞松弛素D預(yù)處理A_(549)細(xì)胞，觀察S.pn對(duì)A_(549)細(xì)胞 的侵襲率；分別使用PLC、TPK、Ca~(2+)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑 U73122、Genistein、Datrolene處理因素預(yù)處理A_(549)細(xì) 胞，觀察其與F-actin細(xì)胞骨架重排百分率間是否存在 劑量依賴關(guān)系；用胰酶處理S.pn得到表面蛋白受破壞的 S.pn，限制性C+Y培養(yǎng)液中膽堿成分被20μg/ml乙醇 重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生論文 胺替代后得到不含膽堿的S巾n菌體，以觀察上述兩種 SFn亞組分對(duì)F吃ctin細(xì)胞骨架重排的影響；用Fura＜AM 熒光探針負(fù)載 A刊。細(xì)胞后測(cè)定 S巾n粘附 A刊。細(xì)胞 3 0， 60，90min的胞內(nèi)［Ca卜］；濃度。結(jié)果：Son作用 A訃。細(xì) 胞后，經(jīng)FITC－phalloidin 熒光染色，F(xiàn)－actin細(xì)胞骨架 呈塊狀、絲狀聚集，F(xiàn)吃ctin細(xì)胞骨架重排抑制劑細(xì)胞松 弛素D可明顯降低S｝n 對(duì)A刊。細(xì)胞的侵襲率，在其濃 度為0．25pg／ml時(shí)，未得到可測(cè)的細(xì)菌數(shù)；PLC、TPK、 Ca卜三種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑抑制可部分抑制A刊。細(xì)胞 F《ctin 細(xì)胞骨架重排，三種抑制劑與F心ctin 細(xì)胞骨架 重排百分率間存在量效關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)分別為： rpLc。－0．88（P＜0．05）： rTpK二－0．91（P＜0．05）： re。2＋二－0．86 （P＜0刀5人S｝n膽堿成分及其表面蛋白不影響F心ctin 細(xì)胞骨架重排的發(fā)生；SFn粘附A川。細(xì)胞30，60，90min 后的胞內(nèi)［Ca卜］；高于對(duì)照（187．4土 17．3nmol八人 并達(dá)到 飽和，分別 為487．5士38二，548．2士35＊，557．2士 47．5 nmol八。結(jié)論：上述結(jié)果提示 SFn可通過(guò) PLC、TPK、 Cay細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑觸發(fā)A刊。細(xì)胞F叼ctin細(xì)胞骨架重 排，進(jìn)而導(dǎo)致S｝n侵襲A訃。細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉振偉,王福莊,要航,丁愛(ài)石,黃燕華;用Fura-2測(cè)定缺氧時(shí)海馬細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;1994年03期

本文編號(hào)：2804887