本文關鍵詞：哺乳動物上皮細胞中鞘糖脂在登革病毒感染中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：登革病毒(dengue virus,DENV)屬于黃病毒科(Flavivirade)黃病毒屬(Flavivirus),是目前世界上分布最廣泛的由蚊類傳播的蟲媒病毒。截至目前,還沒有安全有效的疫苗或者抗病毒藥物來治療登革病毒引起的疾病。鞘糖脂是由神經酰胺和糖類構成的糖脂分子,普遍分布于真核細胞的膜類結構上。最近,有研究發(fā)現鞘糖脂通過調節(jié)病毒感染宿主細胞的多個步驟來參與病毒感染。然而,鞘糖脂在登革病毒感染中的具體作用仍然不明確。在本研究中,我們采用小鼠黑色素瘤B16細胞和缺失鞘糖脂的突變體GM95細胞來研究鞘糖脂在登革病毒感染中的作用。結果發(fā)現與野生型B16細胞相比,缺失鞘糖脂的GM95細胞對登革病毒極不敏感:GM95細胞中病毒的復制水平,細胞上清中的活病毒量,都比野生型對照B16細胞中顯著降低。用抑制鞘糖脂合成的抑制劑大豆皂苷或者PPMP來處理B16細胞,或者用RNAi的方法干擾B16細胞中三種主要鞘糖脂合成酶(mt3gal5,ma4Gal T or mb3Gn T),都能抑制登革病毒感染。相反地,在GM95細胞中加入外源鞘糖脂GM3,能部分的恢復登革病毒感染。同時,我們發(fā)現B16細胞感染登革病毒后,代表性的酸性鞘糖脂GM3的含量顯著上升,鞘糖脂合成酶基因的表達也顯著上調。這些結果提示了鞘糖脂在登革病毒感染上皮細胞B16過程中發(fā)揮作用。為了研究鞘糖脂參與登革病毒感染細胞的具體機制,我們用病毒基因定量PCR測定和羅丹明染料標記登革病毒等方法,來研究B16和GM95細胞對登革病毒的結合和內吞效率。結果表明,GM95細胞結合和內吞登革病毒的能力與B16細胞相比并無顯著性差異。進一步實驗發(fā)現,鞘糖脂對登革病毒的RNA復制起重要作用。向B16和GM95細胞中轉染DNA型登革病毒復制子后,復制子在B16細胞中的復制水平顯著地高于GM95細胞。此外,在登革病毒感染的B16細胞胞質中,病毒復制復合物的組成成分之一非結構蛋白NS4A與鞘糖脂GM3在內質網膜區(qū)域有部分共定位。這些實驗數據表明,鞘糖脂不參與上皮細胞對登革病毒的結合和內吞作用,但影響病毒復制。靶向鞘糖脂的合成可成為潛在的抑制登革病毒感染的新思路。
【關鍵詞】：登革病毒 鞘糖脂 病毒復制復合物
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R373
【目錄】：

• 摘要4-5
• abstract5-8
• 前言8-12
• 材料與方法12-23
• 一、實驗材料12-14
• 二、實驗方法14-23
• 實驗結果23-39
• 一、缺失鞘糖脂的GM95細胞對登革病毒不敏感23-26
• 二、抑制野生型B16細胞中鞘糖脂的合成能抑制登革病毒的感染26-29
• 三、鞘糖脂GM3在登革病毒感染的B16細胞中表達上調29-31
• 四、鞘糖脂不影響細胞對登革病毒的結合和內吞31-34
• 五、鞘糖脂的缺失影響登革病毒的復制34-37
• 六、鞘糖脂GM3與登革病毒RNA復制復合物共定位37-39
• 討論39-42
• 小結42-43
• 參考文獻43-48
• 綜述 鞘糖脂與病毒感染的關系及其在抗病毒中的作用48-58
• 一、鞘糖脂的結構、分類及生物合成48-49
• 二、病毒的生活周期49-50
• 三、鞘糖脂與病毒的生活周期50-52
• 四、鞘糖脂的抗病毒作用52
• 展望52-53
• 參考文獻53-58
• 碩士期間所完成的論文58-59
• 附錄59-60
• 致謝60-61

【參考文獻】

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1 王艷萍;王征;朱健;俞云會;許秀坤;李云森;;鞘糖脂研究進展[J];生命科學;2011年06期

  本文關鍵詞：哺乳動物上皮細胞中鞘糖脂在登革病毒感染中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：278177