本文關鍵詞：B群腦膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保護作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]構建B群腦膜炎奈瑟菌pc DNA3.1(+)/NMB0315真核表達重組載體,免疫雌性BALB/c小鼠,檢測其誘導小鼠產生的特異性體液免疫和細胞免疫應答水平、免疫血清體外殺菌效果及免疫保護作用,初步探討pc DNA3.1(+)/NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保護效果,為研制一種新的預防B群流腦的核酸疫苗提供可靠的實驗依據(jù)。[方法]以B群腦膜炎奈瑟菌標準株MC58基因組DNA為模板,PCR擴增NMB0315基因,克隆至pc DNA3.1(+)載體中,經(jīng)Bam H I和Xho I雙酶切及測序鑒定重組載體。將構建好的pc DNA3.1(+)/NMB0315重組載體經(jīng)脂質體轉染COS-7細胞和RAW264.7細胞,采用免疫組織化學和Western blot法檢測重組蛋白在真核細胞中的表達,RT-q PCR法檢測NMB0315基因m RNA的相對表達水平。大量提取重組質粒,肌肉或腹腔皮下注射法免疫雌性BALB/c小鼠,間接ELISA法檢測核酸疫苗免疫小鼠血清中抗NMB0315特異性總Ig G及其亞類抗體水平、小鼠生殖道黏膜分泌物中抗NMB0315特異性s Ig A抗體水平及經(jīng)pc DNA3.1(+)/NMB0315刺激后小鼠脾淋巴細胞上清液中IFN-γ、IL-4水平,CCK8法檢測小鼠脾淋巴細胞增殖刺激指數(shù)(SI);按一定比例混合乳兔補體、免疫血清及生長至對數(shù)期的MC58菌液,測定免疫血清體外殺菌效價;觀察pc DNA3.1(+)/NMB0315核酸疫苗對感染B群腦膜炎奈瑟菌雌性BALB/c小鼠的免疫保護效果。[結果]成功構建的真核表達載體pc DNA3.1(+)/NMB0315能夠在真核細胞中有效轉錄和表達。pc DNA3.1(+)/NMB0315核酸疫苗具有良好的免疫原性,能誘導小鼠產生較高水平的體液免疫應答:包括血清特異性Ig G、Ig G1、Ig G2a、Ig G3、Ig G2b和生殖道黏膜特異性s Ig A,免疫后第6周抗體效價分別為1:50,000、1:40,000、1:35,000、1:30,000、1:15,000和1:30,000;在核酸疫苗免疫的2、4、6周,血清Ig G2a/Ig G1的比值分別為0.775,0.744,0.614,比值均小于1。核酸疫苗也能誘導產生較高水平的細胞免疫應答,疫苗免疫第6周,小鼠脾淋巴細胞增殖反應SI值(1.87±0.124)明顯高于PBS(0.68±0.132)、Cp G(0.71±0.153)和pc DNA3.1(+)(0.69±0.144)對照組(P0.001)。與體液免疫有關的細胞因子IL-4(181.87±24.31pg/m L)和細胞免疫有關的細胞因子IFN-γ(102.87±16.43pg/m L)的水平,pc DNA3.1(+)/NMB0315+CPG組均明顯高于PBS、Cp G和pc DNA3.1(+)對照組(P0.001)。核酸疫苗免疫血清在補體介導下的體外殺菌抗體效價為1:128,72小時內對實驗小鼠的免疫保護率為70%。[結論]1.核酸疫苗pc DNA3.1(+)/NMB0315具有良好的免疫原性,能誘導實驗小鼠產生高水平的體液免疫和細胞免疫;也能誘導生殖道黏膜局部產生較高水平的特異性s Ig A抗體。2.核酸疫苗pc DNA3.1(+)/NMB0315對感染B群腦膜炎奈瑟菌的BALB/c小鼠具有良好的免疫保護效果;在補體介導下,末次免疫血清在體外具有較強的殺菌活性。
【關鍵詞】：B群腦膜炎奈瑟菌 外膜蛋白0315 核酸疫苗 免疫活性 免疫保護
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文縮略語索引11-13
• 第1章 緒論13-15
• 第2章 實驗材料15-19
• 2.1 主要的實驗儀器15-16
• 2.2 菌株、質粒及試劑16-19
• 第3章 實驗方法19-35
• 3.1 真核重組載體的構建及鑒定19-25
• 3.2 NMB0315基因在真核細胞中的表達25-30
• 3.3 B群腦膜炎奈瑟菌NMB0315核酸疫苗的免疫保護作用30-34
• 3.4 統(tǒng)計學處理34-35
• 第4章 實驗結果35-63
• 4.1 真核表達載體pc DNA3.1(+)/NMB0315的構建及鑒定35-37
• 4.2 NMB0315 基因在真核細胞中的表達37-39
• 4.3 NMB0315 核酸疫苗免疫活性評價39-59
• 4.4 核酸疫苗的免疫保護效果和免疫血清體外殺菌活性59-63
• 第5章 討論63-67
• 第6章 結論67-69
• 參考文獻69-75
• 綜述75-83
• 參考文獻80-83
• 附錄83-88
• 作者攻讀學位期間的科研成果88-89
• 本研究受以下基金資助89-90
• 致謝90

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