【摘要】： 用cDNA芯片從熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(heat shock transcription factor 1，HSF1)基因敲除小鼠心肌組織中篩選熱休克反應(yīng)中受HSF1調(diào)控的靶基因，并對篩選到的未知基因進行分子克隆。方法：①用cDNA芯片檢測熱休克反應(yīng)(42℃ 15分鐘，恢復(fù)3小時)中HSF1~(-/-)小鼠心肌組織基因表達譜的改變(以HSF1~(+/+)小鼠為對照)；②用RT-PCR對cDNA芯片篩選結(jié)果進行驗證；③對差異表達的已命名基因進行啟動子區(qū)HSF1結(jié)合位點的分析；④利用生物信息學方法對篩選到的未知基因進行分子克隆。結(jié)果：①共篩選到差異表達基因1142個；其中在HSF1~(-/-)小鼠心肌中表達下調(diào)的基因為398個，已命名基因為173個；在HSF1~(-/-)小鼠心肌中表達上調(diào)的基因為641個，已命名基因為235個。②在HSF1~(-/-)小鼠心肌中表達下調(diào)2.5倍的已命名基因中，有5個基因啟動子區(qū)含有熱休克元件(heat shock element，HSE)；在HSF1~(-/-)小鼠心肌中表達上調(diào)2.5倍的已命名基因中，有5個基因啟動子區(qū)含有HSE；③克隆并在GenBank上登錄人XLHSRF-1基因(GenBank ID：AY221994)和大鼠XLHSRF-2基因(GenBank ID：AY248698)。結(jié)論：在熱休克反應(yīng)中，HSF1~(-/-)小鼠心肌中多個基因表達發(fā)生改變；在這些差異表達基因中，有10個基因啟動子區(qū)含HSE元件，可能受HSF1直接調(diào)控；采用生物信息學方法，克隆了兩個新的應(yīng)激相關(guān)基因，為進一步研究這些基因的功能及其在應(yīng)激反應(yīng)中的作用奠定了基礎(chǔ)。
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R363
【圖文】：

一1對照組/實驗組雙色熒光標記疊加圖

饗緣陀諂湓誥酇刃菘舜鐚淼丮sFI+/十小鼠心肌中的表達(圖3.3一2)。KLF4、Aeasl、HSPaga和GAPDH的引物見表3.3一1。表3.3一1RT一PCR引物序歹l」LengthofGenBankGenenamePrimersequeneePCRIDProducts/bPM32599Glyeeraldehydes一3一phosphateAAGCCCATCACCATCTTCCA/580dehydrogenase(GAPDH)CCTGCTTCACCACCTrCTTGNM_010637MusmuseulusKruppel一likeGCGGGAAGGGAGAAGACAC/297faetor4(gut)(Klf4)，mRNAGGGGAAGACGAGGATGAAGCNM_019811Musmuseulusaeetyl一CoenzymeGGAACTTGTGGTGGCTATGC/299Asynthetasel(AMPforming)GACATCTGGACA’rGGCCTCT(AeaSI)，mRNANM_010481MusmuseulusheatshoekTGGCTGGTGACGTTACAGAC/300protein，74kDa，A(HSpaga)，GGCAGAAACGTGCACAATCCmRNAKLF4AeaslHsPagaM一亡trl麗CtrlHSCtrlHS不了干刁二刁干一/二一不/千刁一+/、一介+/+一/-一斗/十一/二-603bP一卜310bP一卜GAPDH圖3.3一2RT一PcR對下調(diào)基因的進一步分析”::arkofmolecularmas:(小X174DNA/Haelll)，Ctrl:未經(jīng)熱休克處理對照組，HS:熱休克處理組

【參考文獻】

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1 袁開宇,趙震宇,劉瑛,鄒江,劉梅冬,陳廣文,尢家

本文編號：2728758