【摘要】： 前言 多臟器功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)是危重患者主要死亡原因之一，其機(jī)制不甚明確。目前普遍認(rèn)為全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)可能是MODS最主要的病理學(xué)基礎(chǔ)和根本原因。SIRS發(fā)生時，啟動或活化體內(nèi)各種活性細(xì)胞、補(bǔ)體系統(tǒng)、凝血和纖溶系統(tǒng)，釋放多種炎癥介質(zhì)，在體內(nèi)相互作用呈失控狀態(tài)，并逐級放大，加重組織、器官的進(jìn)一步損害，最終發(fā)展至MODS�，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對MODS的發(fā)生機(jī)制的認(rèn)識雖然有了長足的進(jìn)步，治療方面尤其是針對炎癥介質(zhì)的過度釋放和造成炎癥介質(zhì)的原因采取了如抗內(nèi)毒素的單克隆和多克隆抗體、抗細(xì)胞因子與繼發(fā)性介質(zhì)生物調(diào)節(jié)物等許多新方法，提出抗生素、抗內(nèi)毒素、抗炎癥介質(zhì)的三抗療法。諸多方法取得一定成果，但迄今尚無一種通過Ⅲ期臨床試驗，MODS的病死率仍高達(dá)70％左右。目前迫切需要一種能有效抑制炎癥反應(yīng)，并對臟器損害起保護(hù)作用且無明顯副作用的方法。亞低溫對急性腦損傷、腦復(fù)蘇及器官移植的臟器保護(hù)作用已被證實。本實驗主要通過測定亞低溫情況下SIRS動物模型血清酶及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化，肺組織TNF-αmRNA及肝組織腺苷酸及乳酸的含量改變，對亞低溫能否減輕炎癥反應(yīng)和SIRS動物模型損傷以及能否推廣至SIRS和MODS的防治做初步探討，從而阻止或延緩多器官功能障礙綜合征的發(fā)生，為臨床防治SIRS和MODS提出治療新途徑。 材料與方法 l、動物模型 60只Wistar大鼠予3％戊巴比妥40mg／kg腹腔注射麻醉生效 后，隨機(jī)分為正常對照組＼內(nèi)毒素組和亞低溫組。內(nèi)毒素組和亞低 溫組腹腔注射內(nèi)毒素K0mg／kg）制成大鼠SIRS的動物模型。正 常對照組腹腔注射等量生理鹽水。亞低溫組注射內(nèi)毒素后立即給 予亞低溫干預(yù)，向動物全身噴灑涼水KtX將多導(dǎo)生理記錄儀肛 溫探針插人大鼠直腸中持續(xù)監(jiān)測肛溫，再通過調(diào)節(jié)室溫，輔以電熱 毯和加熱燈，監(jiān)測亞低溫組動物肛溫維持于32－33℃之間。 2、標(biāo)本采集和處理 各組于實驗1上和3小時各取6只動物于無菌條件下取材， 肺組織置于去RNA酶的EPPendorf管中－80t凍存，待測TNF－a InRNA。實驗3小時各組取8只動物剖開腹腔肝組織取材液氮中 保存，待測腺耷酸及乳酸的含量。于剖腹前球后V叢取血IInl，分 離血清凍存，待測血清酶。同時留取肺及肝組織置于2．5％戊二 醛及二甲砷酸緩沖液中固定，進(jìn)行透射電鏡觀察。 3、實驗方法 門）應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT－PCR）方法研究TNF－a 在SIRS大鼠肺組織分子水平的表達(dá)：用TRIZOL總yA提取試 劑提取肺組織tllnry A，反轉(zhuǎn)錄合成O＊A的第一鏈，再經(jīng)凝膠電泳 成像及分析系統(tǒng)掃描PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，以p－action內(nèi)參照標(biāo)化 TNF一。含量。 p）利用全自動生化分析儀生化方法檢測血清酶ALTJST、 ASP＊DH＊K各項指標(biāo)的變化。 O）各組大鼠肝組織標(biāo)本分別稱重后加人 0．srnL的 10％高 氯酸中，在冰浴下間斷超聲勻漿高壓液相色譜法測定各組大鼠肝’ ·2· 組織ATP、ADP、AMP含量變化。 K）嚴(yán)格按乳酸測試盒說明書生化方法測定肝組織乳酸含量 變化，勻漿液中蛋白測定采用考馬斯亮蘭法。 O）于日立H－600透射電鏡下觀察各組動物肺組織、肝組織 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的形態(tài)改變。 4、統(tǒng)計學(xué)分析：所得數(shù)據(jù)以均值土標(biāo)準(zhǔn)差沁幻）表示，采用 SAS統(tǒng)計軟件處理，樣本均數(shù)比較采用 Dunnett t檢驗。 結(jié) 果 l、內(nèi)毒素組及亞低溫組血清酶各項數(shù)值（除堿性磷酸酶）均 較正常對照組明顯升高帥＜0．01，p＜0．05人且內(nèi)毒素組各項指 標(biāo)明顯高于亞低溫組h＜0．01八 人正常對照組肺組織及肝組織細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)形態(tài)正常。亞低 溫組細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變輕微，內(nèi)毒素組病理改變明顯。 3、內(nèi)毒素組比正常對照組肝組織ATP人DP含量顯著減少（P ＜0．01），AMP含量明顯減少（p＜0．05）；亞低溫組 ATP、ADP含 量比正常對照組有減少趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異性帥＞0．05廠與內(nèi) 毒素組相比，亞低溫組 ATP、ADP含量明顯高于內(nèi)毒素組（p＜0． 05）。 4、內(nèi)毒素組比正常對照組乳酸含量明顯增加帥＜0．05廠亞 低溫組比正常對照組乳酸含量有增加趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異h＞ 0．05人亞低溫組乳酸含量明顯低于內(nèi)毒素組h＜0．05八 5、正常對照組有少量TNF－a mRNA表達(dá)。內(nèi)毒素組與亞低 溫組均較正常對照組各時點表達(dá)增強(qiáng)帥＜0．05人 內(nèi)毒素組比亞 低溫組表達(dá)明顯增強(qiáng)h＜0．05X尤以 for顯著h＜0．01入并于 Zlir達(dá)到高峰，約為正常對照組的二．8倍，3hr有減低趨勢，但無統(tǒng) 計學(xué)差異（p＞0．05）。 ·3· 討 論 SIRS是指機(jī)體對各種嚴(yán)重刺激或打擊引起的全身失控性炎 癥免疫反應(yīng)，最終序貫發(fā)展至 MODS。Tisherman等發(fā)現(xiàn)用亞低溫 方法治療創(chuàng)傷低灌注患者時具有保護(hù)細(xì)胞和減少繼發(fā)性炎癥反應(yīng) 和多臟器衰竭的可能，能否推廣至SIRS／MODS的防治需進(jìn)一步探
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2725284