【摘要】：[目的] 研究骨髓基質(zhì)細胞(bone marrow stromal cells，BMSC)體外培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化情況。并初步探討以珊瑚為骨組織工程支架材料的可行性和細胞在材料上的生長情況，以尋求適宜的骨組織工程支架材料。 [方法] 抽取約2月齡兔骨髓，分離骨髓基質(zhì)細胞進行體外培養(yǎng)，并向成骨細胞定向誘導(dǎo)分化。將誘導(dǎo)的BMSC消化離心收集細胞，取一定濃度接種于珊瑚材料上，進行聯(lián)合培養(yǎng)，觀察細胞在珊瑚上生長狀況。 [結(jié)果] (1)提取的骨髓基質(zhì)細胞呈貼壁生長，誘導(dǎo)后可向成骨細胞分化，細胞呈成骨細胞形態(tài)為梭形和多角形。細胞連續(xù)培養(yǎng)可以互相重疊呈復(fù)層生長，無接觸抑制現(xiàn)象，并可形成鈣化結(jié)節(jié)；(2)用改良鈣鈷染色法檢測誘導(dǎo)細胞堿性磷酸活性呈強陽性。骨鈣素分泌水平比常規(guī)對照組明顯增高，電子探針分析提示誘導(dǎo)細胞基質(zhì)鈣離子、磷離子含量明顯高于用完全DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞，掃描電鏡觀察細胞呈較典型的成骨細胞狀態(tài)，并可見鈣鹽沉積。改良MTT法測定顯示骨髓基質(zhì)細胞于第7，8天左右可達到增殖高峰；(3)誘導(dǎo)細胞和未誘導(dǎo)細胞傳代約12代時細胞形態(tài)有所改變，至16代左右細胞體積明顯變大，看起來更加扁平，呈不規(guī)則形狀貼附于瓶底。其活力明顯下降，趨于衰老；(4)誘導(dǎo)細胞可以在珊瑚上繼續(xù)黏附、生長、增殖和分化。掃描電鏡檢測可見細胞向珊瑚孔隙內(nèi)生長，呈多角形，并有突起相互連接。有的細胞可覆蓋孔隙表面，并可見鈣結(jié)節(jié)形成。 [結(jié)論] (1)骨髓基質(zhì)細胞具有來源充足，取材方便，創(chuàng)傷小無明顯并發(fā)癥。而且其分化增殖能力較強，成骨能力確定。所以采用骨髓基質(zhì)細胞作為種子細胞構(gòu)建組織工程骨有比較可靠的依據(jù) (2)通過骨髓基質(zhì)細胞與珊瑚支架材料的聯(lián)合培養(yǎng)，珊瑚對于BMSC的生物相容性較好，未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)。實驗表明骨髓基質(zhì)細胞可在珊瑚上生長、增殖、鈣化。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R329

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號：2722736