【摘要】：細胞增殖、分化、凋亡與衰老是細胞最重要的生命活動現(xiàn)象，它們既相互聯(lián)系又相互制約，細胞凋亡是受外環(huán)境多種信號刺激，由基因調(diào)控的“主動自然”死亡過程，在細胞增殖分化及多種病理過程中具有重要互補作用。它是機體發(fā)育過程的重要平衡因素。 細胞凋亡是一個主動的由基因決定的自動結(jié)束生命的過程，細胞凋亡對于多細胞生物個體發(fā)育的正常進行、自穩(wěn)平衡的保持以及抵御外界各種因素的干擾方面都起著非常關(guān)鍵的作用，通過細胞凋亡，有機體得以清除不再需要的細胞，而不引起炎癥反應(yīng)，在成熟個體的組織中，細胞的自然更新，被病原體感染細胞的清除也是通過細胞凋亡（PCD）來完成的，另一方面，細胞凋亡的失調(diào)包括不恰當(dāng)?shù)募せ罨蛞种茣䦟?dǎo)致疾病。 血紅素加氧酶-1(HO1)是一種靠加壓刺激誘導(dǎo)的熱激動蛋白，HO1與細胞色素P450還原酶（CPR）和膽綠素還原酶協(xié)同作用能將血紅蛋白轉(zhuǎn)換成膽紅素、一氧化碳和鐵，而這三種產(chǎn)物是有毒的，特別是細胞內(nèi)的三價鐵離子，因為它提供形成自由基的離子，損害DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。血紅素加氧酶-1（HO1）能減低細胞內(nèi)的三價鐵離子的水平，能參與細胞內(nèi)加壓應(yīng)答作用，使細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)免于變性，從而保護細胞免于凋亡。 研究血紅素加氧酶-1在細胞凋亡過程中所扮演的重要角色，能使我們更進一步了解細胞凋亡的影響因素。保護細胞的正常凋 WP=36 亡，祛除有害的誘導(dǎo)細胞凋亡的因素，使機體得以正常、健康地生存。 在本研究中采用四種模型即野生型鼠纖維原細胞、血紅素加氧酶-1缺陷型纖維原細胞、CPR-293細胞和HO1/CPR-293細胞，利用星形孢菌素或鬼臼亞乙苷（表鬼臼毒吡喃葡糖苷）處理細胞和生理性加壓使?jié){液丟失，誘導(dǎo)細胞凋亡。 1采用漿液丟失誘導(dǎo)的細胞凋亡 失去漿液是一種廣泛用于細胞加壓模型的，與生長因子和營養(yǎng)品的消耗相關(guān)，可誘使細胞凋亡，通過加壓作用使?jié){液丟失可誘使細胞死亡，我們對比野生型和去血紅素加氧酶-1型細胞在漿液丟失前二者顯示相同的核形態(tài)，用Hoechst33258染料檢測細胞核的形態(tài)，細胞凋亡速率低于天然的凋亡速率，失去漿液，野生型細胞的保持正常核形態(tài)，血紅素加氧酶-1缺陷型（HO1-1-）細胞顯示大多數(shù)核變小，而且濃縮，DNA梯狀條帶形成，說明血紅素加氧酶-1（HO1）在細胞凋亡過程中起重要保護細胞功能。 用星形孢菌素或鬼亞臼乙苷處理野生型細胞和血紅素加氧酶-1缺陷型（HO1-1-）細胞4-24小時，并用凝膠電泳檢測細胞凋亡的DNA碎片，當(dāng)處理20小時后，在 HO1-1-細胞中我們發(fā)現(xiàn)大塊DNA碎片，而野生型細胞則沒有，顯示HO1是保護細胞免于細胞凋亡所必須的。 2生理加壓誘導(dǎo)細胞凋亡 我們用穩(wěn)定的CPR細胞株和HO1和CPR在一起的細胞株實驗，當(dāng)漿液丟失4天后，CPR-293細胞表現(xiàn)出有實質(zhì)的核濃縮和DNA梯狀條帶的形成，而HO1/CPR-293細胞則沒有，顯示HO1是充分保護細胞，避免在漿液丟失情況下而誘導(dǎo)的細胞凋亡。 在本研究中采用四種模型即野生型鼠纖維原細胞、血紅素加氧 WP=37 酶-1缺陷型纖維原細胞、CPR-293細胞和HO1/CPR-293細胞，利用星形孢菌素或鬼臼亞乙苷（表鬼臼毒吡喃葡糖苷）處理細胞和生理性加壓使?jié){液丟失，誘導(dǎo)細胞凋亡。在研究中發(fā)現(xiàn)，同等條件下，HO1-1-型細胞比野生型細胞更易出現(xiàn)細胞核變小濃縮，DNA梯狀條帶的形成等細胞凋亡現(xiàn)象，反映HO1能有效防止細胞凋亡，促進細胞正常生長，HO1在細胞保護方面扮演重要角色，HO1是一種靠加壓刺激誘導(dǎo)的蛋白，在漿液丟失情況下，能保護細胞內(nèi)的蛋白免于變性，參與細胞內(nèi)的壓力應(yīng)答，并能充分地保護細胞。 本研究對血紅素加氧酶-1與細胞凋亡的相關(guān)性做了初步的探索和研究，發(fā)現(xiàn)HO具有保護細胞的功能，為今后進一步揭示血紅素加氧酶-1在細胞凋亡中的作用機制提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R341

【引證文獻】

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1 于華蕓;熱性、寒性中藥對大鼠肝全基因表達譜影響的研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2010年

本文編號：2715579