【摘要】：細(xì)胞增殖、分化、凋亡與衰老是細(xì)胞最重要的生命活動(dòng)現(xiàn)象，它們既相互聯(lián)系又相互制約，細(xì)胞凋亡是受外環(huán)境多種信號刺激，由基因調(diào)控的“主動(dòng)自然”死亡過程，在細(xì)胞增殖分化及多種病理過程中具有重要互補(bǔ)作用。它是機(jī)體發(fā)育過程的重要平衡因素。 細(xì)胞凋亡是一個(gè)主動(dòng)的由基因決定的自動(dòng)結(jié)束生命的過程，細(xì)胞凋亡對于多細(xì)胞生物個(gè)體發(fā)育的正常進(jìn)行、自穩(wěn)平衡的保持以及抵御外界各種因素的干擾方面都起著非常關(guān)鍵的作用，通過細(xì)胞凋亡，有機(jī)體得以清除不再需要的細(xì)胞，而不引起炎癥反應(yīng)，在成熟個(gè)體的組織中，細(xì)胞的自然更新，被病原體感染細(xì)胞的清除也是通過細(xì)胞凋亡（PCD）來完成的，另一方面，細(xì)胞凋亡的失調(diào)包括不恰當(dāng)?shù)募せ罨蛞种茣䦟?dǎo)致疾病。 血紅素加氧酶-1(HO1)是一種靠加壓刺激誘導(dǎo)的熱激動(dòng)蛋白，HO1與細(xì)胞色素P450還原酶（CPR）和膽綠素還原酶協(xié)同作用能將血紅蛋白轉(zhuǎn)換成膽紅素、一氧化碳和鐵，而這三種產(chǎn)物是有毒的，特別是細(xì)胞內(nèi)的三價(jià)鐵離子，因?yàn)樗峁┬纬勺杂苫碾x子，損害DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。血紅素加氧酶-1（HO1）能減低細(xì)胞內(nèi)的三價(jià)鐵離子的水平，能參與細(xì)胞內(nèi)加壓應(yīng)答作用，使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)免于變性，從而保護(hù)細(xì)胞免于凋亡。 研究血紅素加氧酶-1在細(xì)胞凋亡過程中所扮演的重要角色，能使我們更進(jìn)一步了解細(xì)胞凋亡的影響因素。保護(hù)細(xì)胞的正常凋 WP=36 亡，祛除有害的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的因素，使機(jī)體得以正常、健康地生存。 在本研究中采用四種模型即野生型鼠纖維原細(xì)胞、血紅素加氧酶-1缺陷型纖維原細(xì)胞、CPR-293細(xì)胞和HO1/CPR-293細(xì)胞，利用星形孢菌素或鬼臼亞乙苷（表鬼臼毒吡喃葡糖苷）處理細(xì)胞和生理性加壓使?jié){液丟失，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 1采用漿液丟失誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡 失去漿液是一種廣泛用于細(xì)胞加壓模型的，與生長因子和營養(yǎng)品的消耗相關(guān)，可誘使細(xì)胞凋亡，通過加壓作用使?jié){液丟失可誘使細(xì)胞死亡，我們對比野生型和去血紅素加氧酶-1型細(xì)胞在漿液丟失前二者顯示相同的核形態(tài)，用Hoechst33258染料檢測細(xì)胞核的形態(tài)，細(xì)胞凋亡速率低于天然的凋亡速率，失去漿液，野生型細(xì)胞的保持正常核形態(tài)，血紅素加氧酶-1缺陷型（HO1-1-）細(xì)胞顯示大多數(shù)核變小，而且濃縮，DNA梯狀條帶形成，說明血紅素加氧酶-1（HO1）在細(xì)胞凋亡過程中起重要保護(hù)細(xì)胞功能。 用星形孢菌素或鬼亞臼乙苷處理野生型細(xì)胞和血紅素加氧酶-1缺陷型（HO1-1-）細(xì)胞4-24小時(shí)，并用凝膠電泳檢測細(xì)胞凋亡的DNA碎片，當(dāng)處理20小時(shí)后，在 HO1-1-細(xì)胞中我們發(fā)現(xiàn)大塊DNA碎片，而野生型細(xì)胞則沒有，顯示HO1是保護(hù)細(xì)胞免于細(xì)胞凋亡所必須的。 2生理加壓誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡 我們用穩(wěn)定的CPR細(xì)胞株和HO1和CPR在一起的細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)，當(dāng)漿液丟失4天后，CPR-293細(xì)胞表現(xiàn)出有實(shí)質(zhì)的核濃縮和DNA梯狀條帶的形成，而HO1/CPR-293細(xì)胞則沒有，顯示HO1是充分保護(hù)細(xì)胞，避免在漿液丟失情況下而誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。 在本研究中采用四種模型即野生型鼠纖維原細(xì)胞、血紅素加氧 WP=37 酶-1缺陷型纖維原細(xì)胞、CPR-293細(xì)胞和HO1/CPR-293細(xì)胞，利用星形孢菌素或鬼臼亞乙苷（表鬼臼毒吡喃葡糖苷）處理細(xì)胞和生理性加壓使?jié){液丟失，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在研究中發(fā)現(xiàn)，同等條件下，HO1-1-型細(xì)胞比野生型細(xì)胞更易出現(xiàn)細(xì)胞核變小濃縮，DNA梯狀條帶的形成等細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，反映HO1能有效防止細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞正常生長，HO1在細(xì)胞保護(hù)方面扮演重要角色，HO1是一種靠加壓刺激誘導(dǎo)的蛋白，在漿液丟失情況下，能保護(hù)細(xì)胞內(nèi)的蛋白免于變性，參與細(xì)胞內(nèi)的壓力應(yīng)答，并能充分地保護(hù)細(xì)胞。 本研究對血紅素加氧酶-1與細(xì)胞凋亡的相關(guān)性做了初步的探索和研究，發(fā)現(xiàn)HO具有保護(hù)細(xì)胞的功能，為今后進(jìn)一步揭示血紅素加氧酶-1在細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R341

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 于華蕓;熱性、寒性中藥對大鼠肝全基因表達(dá)譜影響的研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2010年

本文編號：2715579