【摘要】： 胚胎干細胞(Embryonic Stem Cells,ES細胞)體外能夠產(chǎn)生多系造血細胞，但迄今尚未發(fā)現(xiàn)其正常分化能產(chǎn)生長期培養(yǎng)啟動細胞(Long-Term Culture-Initiating Cell,LTC-IC)。 首先，從交配期3.5天(days postcoitus,dpc)C57BL／6J小鼠囊胚的內(nèi)細胞團中分離ES細胞并通過體外維持培養(yǎng)建立了ES細胞系MES-1。MES-1在體外間斷傳代32代，具有ES細胞的基本特征。體外能分化形成擬胚體(embryoid body,EB)，，在正常和裸小鼠體內(nèi)具有形成畸胎瘤的能力。 其次，以轉(zhuǎn)染pSV)340neo質(zhì)粒的方法建立了永生化12.5dpcC57BL／6J小鼠胎肝基質(zhì)細胞系A4和B3，并采用有限稀釋分析(limited dilution analysis,LDA)和長期培養(yǎng)集落形成細胞(long-term culture-colony forming cell,LTC-CFC)分析方法研究胎肝基質(zhì)細胞系對骨髓來源的LTC-IC的維持和擴增的影響。A4和B3體外傳代超過22代沒有出現(xiàn)細胞危機現(xiàn)象。A4為成纖維樣細胞，高表達UEA-1、CD29、CD44，低表達CD105；B3為上皮樣細胞，高表達CD105、CD29、CD44，低表達UEA-1。A4、B3體外均能維持骨髓來源的LTC-IC至少4周，其中B3具有明顯的擴增功能；造血相關(guān)因子SCF+IL-3+IL-6+Epo對LTC-IC的維持和擴增沒有影響，但與不同的基質(zhì)細胞協(xié)同作用影響LTC-IC的增殖潛能。 基于上述實驗結(jié)果，采用三步法研究胎肝基質(zhì)細胞B3對MES-1造血分化的影響并檢測第四周時LTC-IC的存在。結(jié)果表明7天的EB細胞與B3共培養(yǎng)，CFC總數(shù)第一周時減少，至第三周時達到高峰；第4周時的增殖細胞中包含LTC-IC，但LTC-IC多數(shù)只能產(chǎn)生CFU-GM。 結(jié)論：建立的C57BL／J小鼠胎肝基質(zhì)細胞系B3體外能夠有效擴增骨髓來源的LTC-IC，可能在12.5dpc小鼠胎肝造血微環(huán)境中以功能性成分起作用的，造血相關(guān)因子SCF+IL-3+IL-6+Epo在本長期培養(yǎng)體系中主要調(diào)節(jié)定向造血祖細胞的增殖和分化、提高LTC-IC的增殖潛能；7天的EB細胞與B3共培養(yǎng)，增殖細胞群體中包含不同分化期的細胞，可能是它們與3天EB條件培養(yǎng)液共同作用誘導未分化的ES細胞分化產(chǎn)生LTC-IC；在本培養(yǎng)體系中，B3參與構(gòu)建EB細胞或ES細胞增殖分化以及維持LTC-IC的微環(huán)境。
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R329

【參考文獻】

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1 柴桂萱,韓嶸,尚克剛;C57 BL/6J小鼠ES細胞系的建立及其特性分析[J];細胞生物學雜志;1996年03期

本文編號：2707281