【摘要】：目的：缺血性疾病是臨床上難治性疾病，利用轉基因技術刺激缺血部位生長出健康有效的新生血管成為治療缺血性疾病的研究熱點。最近的研究表明，VEGF基因和Angiopoietin1基因在血管生成的早期和晚期階段分別發(fā)揮著重要作用。腺相關病毒基因轉移系統是一種比較有前途的基因轉移系統。本課題建立一個可同時表達人血管生長素1(Angiopoietin1)和血管內皮生長因子(VEGF)的重組腺相關病毒載體基因轉移系統，為下一步的研究做準備工作。 方法：根據Gene Bank提供的原始序列設計引物Pang1和Pang2，以骨髓cDNA文庫為模版，利用PCR技術，獲取目的基因Angiopoietin1。根據質粒phVEGF的原始序列設計引物Pvegf1和Pvegf2，利用PCR技術，獲取目的基因VEGF165。Angiopoietin1的上游含有HindⅢ酶切位點，下游含有BamHⅠ酶切位點，VEGF165的上游含有BglⅡ位點，下游含有BamHⅠ位點。質粒pAAV-MCS中含有BamHⅠ、BglⅡ、HindⅢ、NotⅠ、XhoⅠ、XbaⅠ、SalⅠ、BspHⅠ、KspⅠ酶切位點。而質粒pZero++中幾乎含有所有常用的酶切位點，利用這一特點，可很容易的找到與上述位點粘端互補的酶切位點，通過體外DNA重組技術，，將Angiopoietin1和VEGF165基因亞克隆進入pAAV-MCS。 結果：測序證實PCR產物Angiopoietin1和VEGF165基因與Gene Bank提供的原始序列完全一致。酶切鑒定與測序鑒定證實重組質粒pAAV VEGF，pAAV Angiopoietin1和pAAV Angiopoietin1-VEGF與預期結果完全一致。在新的重組質粒中，Angiopoietin1和VEGF165各有一套CMV啟動子和poly A終止子系統，保證了兩種基因的共同表達。 結論：人Angiopoietin1和VEGF基因AAV共表達系統的構建成功，為嚴重缺血性疾病基因治療的研究奠定了基礎。
【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R346

【參考文獻】

相關期刊論文 前6條

1 吳立華;動脈硬化閉塞癥與血管新生[J];中國心血管雜志;2002年06期

2 李浩 ,呂偉明 ,劉奕山 ,林勇杰 ,陳國銳;3種動靜脈轉流術治療下肢動脈硬化閉塞癥的療效比較[J];新醫(yī)學;2001年08期

3 段志泉,羅英偉,張平;下肢缺血性疾病的藥物治療[J];中國實用外科雜志;1998年09期

4 張紀蔚,張柏根,張皓,黃曉鐘;復合動脈重建術治療下肢動脈缺血癥(附21例報告)[J];中國實用外科雜志;1998年09期

5 林勇杰,呂偉明,譚最;血栓閉塞性脈管炎外科治療幾種術式療效評價[J];中國實用外科雜志;1998年09期

6 薛蓮，張培華;血栓閉塞性脈管炎研究現況[J];中華普通外科雜志;1997年05期

本文編號：2705569