【摘要】： 睪丸Leydig細(xì)胞合成和分泌雄激素，其主要反應(yīng)途徑是：膽固 醇 膽固醇側(cè)鏈裂解酶（P450scc） 孕烯醇酮 3β-羥甾脫氫酶（3βHSD） 孕酮 17α- 羥化酶（P450c17） 17-羥孕酮 P450c17 雄烯二酮 17-羥甾脫氫酶（17βHSD） 睪 酮。在這一過程中，4種睪酮生成酶的作用非常重要，它們的表達(dá)量 直接影響到Leydig細(xì)胞的睪酮合成量。在機(jī)體中，辜酮生成酶的表達(dá) 受到多種因素在多個(gè)水平的調(diào)節(jié)，近年來有研究發(fā)現(xiàn)類固醇生成因子 -1（steroidogenic factor 1，SF-1）也可能調(diào)節(jié)睪酮生成酶的表達(dá)， 影響睪酮合成。SF-1屬于核受體蛋白，1992年首先由Lala等從牛腎 上腺細(xì)胞核提取物及鼠腎上腺細(xì)胞核提取物中純化得到。通過對一些 睪酮生成酶基因的序列分析，發(fā)現(xiàn)牛和鼠類P450scc、P450c17基因以 及人Ⅱ型3βHSD基因的5’端轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游均存在SF-1的結(jié)合位點(diǎn)， 誘導(dǎo)這些位點(diǎn)突變導(dǎo)致目的基因轉(zhuǎn)錄水平下降，或使得它們對hCG的 反應(yīng)性下降，提示SF-1可能和這些睪酮生成酶的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)有關(guān)，影響 睪酮合成。然而，目前只有資料間接顯示胚胎期SF-1與睪丸雄激素生 成具有相關(guān)性，，本研究目的旨在直接闡述青春期SF-1對睪酮生成的調(diào) 節(jié)作用。 實(shí)驗(yàn)共分三個(gè)部分進(jìn)行：第一部分探討青春期小鼠睪丸組織是 否有SF-1表達(dá)以及它與睪酮生成酶的表達(dá)是否具有相關(guān)性；第二部分 在證實(shí)青春期睪丸SF-1與睪酮生成酶表達(dá)具有相關(guān)性的基礎(chǔ)上，進(jìn)一 步檢測SF-1是否在青春期睪丸Leydig細(xì)胞有表達(dá)，從形態(tài)學(xué)方面證 實(shí)SF-1對睪酮生成的調(diào)節(jié)作用；第三部分在確定SF-1在青春期Leydig 細(xì)胞中表達(dá)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步直概研究Leydig細(xì)胞中SF-1對睪酮生 成酶表達(dá)以及睪酮合成的調(diào)節(jié)作用。 南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 第啼分：青糊小鼠睪丸中SF《與睪酮生成酶InRNA M的相 關(guān)性研究 運(yùn)用半定量盯平CR方法，分別測定了 5天、2 0天和 3 0天。J。鼠睪 丸組織中SF一1及P450scc、P450c17、30HSD、170HSD的mRNA水平， 結(jié)果顯示：5天小鼠性腺功能仍未成熟；睪丸中肝＜：RNA水平毗； 2 0 k，1、鼠開kbil？LN青春期發(fā)育，睪丸中辟八 水平馴上升，但 與5天小鼠相大無明顯差異（P＞0．05），與此同時(shí)P450SCC mRNA水平 也升高；3 0天小鼠個(gè)步發(fā)育成熟，睪丸 SF葉 水平進(jìn)一步增高， 與 5天，J、鼠相比有顯著差異u北．05）；k匕時(shí)P45腫cc mRNA的水平也 達(dá)多高峰，與 5天小鼠相比有顯著差異汀刎．05）。提示SF葉與 P45kCC mRNA的水平呈正相關(guān)變化。＆ SF－lmRNA水平與 P450c17、36HSD、 17即SD mRNA水平之間朋相關(guān)性。這一結(jié)肌分子水平間蝴示了 SF葉與青春期睪酮生成之間的相關(guān)性，它可能參與調(diào)節(jié)P450北c的轉(zhuǎn) 錄，影響睪酮的合成。 第二部分：青春期小鼠睪丸中SF＜的表達(dá) 運(yùn)用免疫組化的方法，測定了 5天、2 0天和 3 0天，J、鼠睪丸中”＜ 的表達(dá)，結(jié)果顯示：5天小鼠Leydg細(xì)胞屬于未成熟型，分泌的雄激 素水平毗，細(xì)觸中未見SF上表達(dá)；20天小鼠進(jìn)入青春期，30天 小鼠進(jìn)一步發(fā)育成熟，它們的 Leydig細(xì)胞馴發(fā)育為成熟型，分雌 激素，f則嫡中耶－1大量表達(dá)。由此可見，SFl在Lcydig細(xì)胞中的 表達(dá)與細(xì)胞的功能發(fā)育及激素生成水平相一致，進(jìn)一步帥態(tài)學(xué)方面 證實(shí)了 SF＜可能參與調(diào)節(jié)青春期睪酮的生成。同時(shí)，實(shí)鞭顯示：5 天小鼠睪丸曲細(xì)精管仍為實(shí)。C細(xì)胞索，只有A型桶細(xì)胞和未成熟型 Sertoli細(xì)胞，此時(shí) S咖li細(xì)胞中有盯4表達(dá)，6 A型精原細(xì)胞未見 SF－l表達(dá)；20、30 A，J、鼠曲細(xì)精管開kb出現(xiàn)管腔，S咖h細(xì)胞轉(zhuǎn)化為 成熟型；SFq表達(dá)消失。生精細(xì)胞同時(shí)帳育分化，開始出現(xiàn)B型精 原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、次級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞等各級生精細(xì)胞， SF 4在B型舶細(xì)帆細(xì)線期、偶線期、粗線期初級精母細(xì)B嚨中表 達(dá)。這一結(jié)果揭示了 SF葉在精子發(fā)生腑中順的作用，尤其在 B 2 南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 型舶細(xì)胞向初級精母細(xì)胞洲以及初蝴母細(xì)胞的第一次成熟分裂 隙中起重抓用，它可能對一些與精子發(fā)生相關(guān)的基固姊調(diào)節(jié)作 用。 第三部分：青釉小鼠睪丸中的葉對N 5 os CC及 3耶D的調(diào)節(jié) 作用 分離青春期小鼠睪丸 LCydig細(xì)胞，槽以體內(nèi)環(huán)境，建立體外培養(yǎng) 細(xì)胞的方法，在培養(yǎng)瞇中加入 hCG刺激，測定細(xì)胞的睪酮分泌量及 細(xì)胞內(nèi) P45帖CC和36HSD mRNA水平。結(jié)果顯示：在LH／hG作用 下，培養(yǎng)的 Leydig細(xì)胞內(nèi) P450scc和 VI型鄧HSD mRNA表棚加， 促進(jìn)睪酮合成，這一結(jié)果與體內(nèi)情況相符合。 在此實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，將SF＋的反義躺替酸轉(zhuǎn)染進(jìn)入培養(yǎng)的Leydig 細(xì)胞，阻斷SF＜蛋白質(zhì)的表達(dá)，測定細(xì)胞的睪酮分泌量及細(xì)胞內(nèi) P450SCC和30HSDtnRN水平。結(jié)果顯示：反義SF4＋hCG作用組的 睪酮含量與空白組相比無顯著差異，卻明顯低于正義SF地CG組及 hCG作用組，提示比G對睪SNob＆．的刺郵用翩于辟l的存在，
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號】：R339.21

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 曲銀娥;COXⅦa在中老年男子部分雄激素缺乏綜合征中的作用及機(jī)理研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

本文編號：2698653