【摘要】：糖尿病是一種由于胰島功能障礙導致血糖失控造成的全身性進行性疾病,近年來,隨著人們生活水平提高,生活方式的改變及人口壽命的延長,糖尿病發(fā)病率迅速增長,據(jù)最近的流行病學調查顯示,我國的糖尿病發(fā)病率已由20年前的0.67%上升到近年來的3.21%,糖尿病患者的人數(shù)已居世界第二位(僅次于美國),據(jù)初步統(tǒng)計我國糖尿病患者總數(shù)約4,000萬人,已成為嚴重的公共衛(wèi)生問題和社會問題。為此,國家衛(wèi)生行政管理部門提出糖尿病的防治工作是目前和今后疾病控制工作的重點之一。 引起糖尿病的根本原因是人體胰島功能受體缺陷,引起胰島B細胞受損,胰島素分泌相對或絕對不足而導致的一種慢性內(nèi)分泌代謝性疾病,血糖的升高只是一種臨床癥狀。因此,及早發(fā)現(xiàn)胰島細胞損傷,盡快恢復胰島細胞的功能,是預防和治療糖尿病的關鍵。 測定血清胰島素水平可作為胰島B細胞分泌功能的重要指標,對判斷胰島B細胞的生理功能及糖尿病、胰島素瘤和胰島素抵抗綜合征等有關疾病的早期診斷、療效觀察、發(fā)病機理以及臨床和基礎研究都有重要的價值。當前國內(nèi)對胰島B細胞功能的體外檢測多采用的是放射免疫方法和進口全自動化學發(fā)光檢測。由于放射免疫方法存在試劑壽命短、檢測時間長、試劑穩(wěn)定性差、需要昂貴儀器并有放射性污染等先天性缺陷而限制了它的推廣和普及,特別在胰島素測定方面,主要表現(xiàn)是特異性差,難以排除胰島素原及其他胰島素類似物的干擾,測定結果反映的是“反應胰島素”,而非真胰島素,不能確切地判斷B細胞的功能狀態(tài)。進口的全自動化學發(fā)光檢測的成本又十分昂貴,病人難以承受的,國內(nèi)化學發(fā)光檢測試劑的研究剛剛起步,產(chǎn)業(yè)化方面更是空白。 本研究自2000年立項,2001年獲河南省重大科技攻關項目(0322030500),歷經(jīng)三年時間完成了該試劑盒的研制工作,為臨床提供了一種新型的血清胰島素檢測方法。 碩士學位論文 人胰島素化學發(fā)光檢測方法的建立及臨床應用 材料與方法:首先建立化學發(fā)光檢測方法,采用HRP一LuminOI增強酶促化 學發(fā)光體系,通過試驗確定HRP一Luminol增強酶促化學發(fā)光最佳反應條件。然 后將其與胰島素免疫檢測方法相結合,建立雙抗體夾心胰島素化學發(fā)光檢測法, 并用該方法檢測151例正常體檢者和234例糖尿病患者等1 572份臨床血清樣 本,同時和目前使用的放射免疫檢測試劑進行比較。統(tǒng)計學方法:數(shù)據(jù)以均數(shù)士 標準差(夏士s)表示,用百分位數(shù)法、方差分析、回歸分析及t檢驗進行分析處 理。部分數(shù)據(jù)作直線相關分析。 結果:l、確定了化學發(fā)光底物的組成以及最佳條件:魯米諾的最佳濃度為 smmollL,HZOZ的濃度為3 mmollL,對碘苯酚的濃度為7mmollL,保護劑A的 濃度為smmollL,保護劑B為1 .smg加L。2、建立了HRP一LUMINOL化學發(fā) 光免疫反應技術平臺,該技術發(fā)光強度高,靈敏度,。一,smollL,線形范圍1。一 10一18 mollL,發(fā)光平臺期達60分鐘,可滿足臨床檢測的高靈敏、寬檢測范圍的 要求。3、建立了人真胰島素化學發(fā)光定量檢測試劑,其靈敏度為0.smU幾,線 形范圍為1.5一160 mU/L,特異性好,和胰島素原(Zooopmo鞏)、C一膚(s000pmol/L) 和胰島素類似物(ZO00pm。譏)無交叉反應,平均回收率為101.7%,批內(nèi)、批間變 異(CV)為4.7%、7.0%。和放免試劑同時測定血清樣本1572份,兩種方法測 定結果高度相關(r二0.9502)a 結論:建立的胰島素化學發(fā)光定量檢測試劑,特異性強,和胰島素原、胰島 素類似物無交叉反應;雙抗體夾心法取代競爭法,靈敏度高;檢測的是真胰島素, 能真實反映胰島B細胞功能,適合臨床指導糖尿病的早期診斷和治療。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R392

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