【摘要】：本文選擇柯薩奇病毒B4(CVB4)為研究對象,構建了具有U6啟動子的CVB4的P1A、P2A、P2B、P3D基因的單siRNA表達載體,在培養(yǎng)細胞內通過細胞病變效應的觀察、收獲病毒的TCID50、蛋白表達量和mRNA表達水平的測定檢測了單siRNA表達載體對CVB4的抑制作用,并檢測了轉染單siRNA表達載體后不同時間用CVB4感染細胞單siRNA表達載體對CVB4的抑制作用。在此基礎上,選擇可有效抑制CVB4復制的單siRNA表達載體,轉移其表達siRNA的基因片段,構建以CVB4 P1A、P2A為靶基因的雙siRNA表達載體pU6/d-siRNA /neo/GFP/C1A-2A,檢測雙siRNA表達載體在培養(yǎng)細胞中對CVB4的抑制作用并比較其與單siRNA表達載體抑制作用的不同。 通過尾靜脈注射法將pU6/d-siRNA /neo/GFP/C1A-2A注射入小鼠體內24h后,腹腔注射CVB4病毒,同時設正常對照組和pU6/d-siRNA/neo/GFP/neg對照組。分別在病毒感染后3d、1w、3w、6w、8w處死小鼠,檢測小鼠的體重、血糖及小鼠胰腺組織內CVB4抗原的表達量及小鼠胰腺的病變情況。 本實驗結果表明,構建的CVB4的單、雙siRNA表達載體在體外培養(yǎng)細胞中可以抑制CVB4的復制;轉染后24h感染CVB4,單siRNA表達載體對CVB4的抑制作用最強。單、雙siRNA表達載體都可以在體外培養(yǎng)細胞內持續(xù)存在并表達siRNA達15d以上,并且雙siRNA表達載體對CVB4的抑制作用比相同靶序列的單siRNA強。在CVB4感染誘導的IDDM小鼠模型中,雙siRNA表達載體,可以抑制CVB4的復制,減輕CVB4感染小鼠胰腺β-細胞的破壞,減輕CVB4誘導的IDDM癥狀或阻止其發(fā)生。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R373

【參考文獻】

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本文編號：2692651