本文關(guān)鍵詞：膠原蛋白基因col-131、col-150、col-121和dpy-5對(duì)秀麗隱桿線蟲生殖與發(fā)育的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：本論文通過分析5-氟尿嘧啶作用秀麗隱桿線蟲以后基因的表達(dá)情況,利用RNA干擾技術(shù)研究基因的沉默表達(dá)對(duì)線蟲生殖和壽命的影響,分析膠原蛋白家族基因在秀麗隱桿線蟲生殖及其他生命活動(dòng)中的重要作用,討論5-氟尿嘧啶對(duì)線蟲的作用機(jī)制。方法：利用高通量數(shù)字基因表達(dá)譜分析,篩選5-氟尿嘧啶作用后基因表達(dá)上調(diào)或者下調(diào)十分顯著的基因,利用RNA干擾技術(shù)得到基因沉默表達(dá)型線蟲,利用光學(xué)顯微鏡觀察RNA干擾型線蟲形態(tài)、產(chǎn)卵量及壽命變化,分析基因的功能及其在通路中的作用。結(jié)果：1.利用數(shù)字基因表達(dá)譜,篩選得到在5-氟尿嘧啶的處理下表達(dá)下調(diào)顯著的col-131、col-150和dpy-5基因和表達(dá)上調(diào)顯著的col-121基因；col-131、col-150和dpy--5基因?qū)儆贓CM-receptor和Focal adhesion通路；col-121基因?qū)儆贔ocal adhesion通路。2.利用飼喂法,將人工構(gòu)建的RNA干擾細(xì)菌喂食秀麗隱桿線蟲,col-131、col-150、col-121和dpy-5基因表達(dá)量均顯著降低,得到RNA干擾型線蟲。3.apy-5基因RNA干擾型線蟲身體短粗,表現(xiàn)出嚴(yán)重的生殖缺陷；col-121基因RNA干擾型線蟲細(xì)長(zhǎng),生殖與發(fā)育受到影響；col-150基因RNA干擾型線蟲產(chǎn)卵量和生存率都有所降低。4.col-131基因表達(dá)沉默對(duì)秀麗隱桿線蟲生殖和壽命沒有明顯影響,但是col-131基因沉默可以減弱5-氟尿嘧啶對(duì)秀麗隱桿線蟲生殖的毒性。col-131基因R,NA干擾型線蟲可以在含有5-氟尿嘧啶的NGM培養(yǎng)基上產(chǎn)卵。當(dāng)線蟲col-131基因表達(dá)沉默以后,線蟲的col-150、col-121和dpy-5基因表達(dá)量均降低。結(jié)論：本論文結(jié)果表明,col-150、col-121和dpy-5基因?qū)π沱愲[桿線蟲生殖的調(diào)節(jié)起到重要的作用。col-131基因可能是與5-氟尿嘧啶作用的靶點(diǎn)密切相關(guān)的基因,并且在ECM-receptor interaction通路和Focal adhesion通路中調(diào)節(jié)其他膠原蛋白家族基因的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：秀麗隱桿線蟲 膠原蛋白基因 RNA干擾 5-氟尿嘧啶
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R383.1
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-9
• 第一章 前言9-15
• 1.1 5-氟尿嘧啶的研究進(jìn)展9-10
• 1.2 秀麗隱桿線蟲的研究進(jìn)展10-11
• 1.2.1 秀麗隱桿線蟲的生物學(xué)特征10
• 1.2.2 秀麗隱桿線蟲作為模式生物的優(yōu)勢(shì)10-11
• 1.2.3 秀麗隱桿線蟲在藥物篩選方面的研究11
• 1.3 膠原蛋白家族基因與信號(hào)通路11-13
• 1.3.1 秀麗隱桿線蟲膠原蛋白家族基因11-12
• 1.3.2 秀麗隱桿線蟲ECM-receptor interaction通路和Focal adhesion通路的研究12-13
• 1.4 RNA干擾機(jī)制與應(yīng)用13-14
• 1.4.1 RNA干擾的機(jī)制13
• 1.4.2 RNA干擾的應(yīng)用13
• 1.4.3 秀麗隱桿線蟲的RNA干擾方法13-14
• 1.5 本論文擬研究的問題和思路14-15
• 第二章 材料和方法15-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料、實(shí)驗(yàn)試劑和實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 2.1.1 線蟲、菌株和質(zhì)粒15
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑15
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-29
• 2.2.1 秀麗隱桿線蟲的培養(yǎng)與同步化16-18
• 2.2.2 數(shù)字基因表達(dá)譜篩選18
• 2.2.3 提取秀麗隱桿線蟲總RNA18-19
• 2.2.4 總RNA反轉(zhuǎn)錄及基因片段的擴(kuò)增19-21
• 2.2.5 克隆載體的構(gòu)建21-23
• 2.2.6 表達(dá)載體的構(gòu)建23-25
• 2.2.7 dsRNA的表達(dá)25-26
• 2.2.8 RNAi秀麗隱桿線蟲的鑒定26-27
• 2.2.9 基因缺陷型秀麗隱桿線蟲生殖情況的測(cè)定27
• 2.2.10 基因缺陷型秀麗隱桿線蟲壽命的測(cè)定27
• 2.2.11 利用DAPI染色,觀察基因缺陷型線蟲形態(tài)變化27-28
• 2.2.12 5-氟尿嘧啶作用基因缺陷型秀麗隱桿線蟲28
• 2.2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28-29
• 第三章 結(jié)果29-38
• 3.1 5-氟尿嘧啶作用以后秀麗隱桿線蟲數(shù)字基因表達(dá)譜的篩選結(jié)果29-30
• 3.2 秀麗隱桿線蟲總RNA提取結(jié)果30
• 3.3 col-131、col-150、col-121和dpy-5基因片段擴(kuò)增的結(jié)果30-31
• 3.4 克隆載體的構(gòu)建結(jié)果31-32
• 3.5 表達(dá)載體的構(gòu)建結(jié)果32-33
• 3.6 IPTG濃度對(duì)RNAi效果的影響及col-131、col-150、col-121和dpy-5基因的RNAi結(jié)果33-34
• 3.7 RNAi型線蟲形態(tài)觀察34-35
• 3.8 RNAi型線蟲產(chǎn)卵量的情況35-36
• 3.9 RNAi型線蟲存活率情況36
• 3.10 RNA干擾型線蟲暴露于5-氟尿嘧啶的生殖情況和基因表達(dá)的變化36-38
• 第四章 討論38-41
• 4.1 膠原蛋白家族基因的功能分析38-39
• 4.2 col-131基因功能預(yù)測(cè)39
• 4.3 ECM-receptor interaction通路和Focal adhension通路的作用機(jī)制分析39-40
• 4.4 5-氟尿嘧啶對(duì)秀麗隱桿線蟲生殖缺陷影響的機(jī)制分析40-41
• 第五章 結(jié)論41-42
• 5.1 主要結(jié)論41
• 5.2 研究展望41-42
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 綜述：人類膠原蛋白的研究現(xiàn)狀47-54
• 綜述參考文獻(xiàn)51-54
• 在學(xué)期間的研究成果54-55
• 附錄一 英語縮略詞匯表55-56
• 致謝56

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 譚暉,李一琴,張志偉,周秀田,曾希,曹建國;5-Fu抗結(jié)腸癌作用與細(xì)胞凋亡及P-gp蛋白表達(dá)的關(guān)系[J];南華大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年03期

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  本文關(guān)鍵詞：膠原蛋白基因col-131、col-150、col-121和dpy-5對(duì)秀麗隱桿線蟲生殖與發(fā)育的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：268651